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“醒脑开窍”针法对局灶性脑缺血模型大鼠基底节蛋白质组学影响的研究

李镕源  
【摘要】:研究目的: 1 构建局灶性脑缺血模型大鼠基底节蛋白质组差异表达图谱,旨在发现与脑缺血相关蛋白质,探讨脑缺血的病理机制。 2 采用石学敏院士创立的“醒脑开窍”针法,研究针刺对局灶性脑缺血大鼠基底节蛋白质组表达的影响。 研究方法: Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组及“醒脑开窍”针刺组。各组又分为6h和24h两个亚组。采用大脑中动脉线栓法(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,大鼠清醒后行神经功能缺损评分,评分达3分者视为模型成功,进入下一阶段实验。针刺组选取石学敏院士“醒脑开窍”法主穴内关、人中,采用电针进行针刺,参数为:频率2Hz,电流3mA,时间为1min。各组在规定时间快速断头取脑,剥离缺血侧基底节,提取基底节组织总蛋白进行双向电泳(第一向采用固相pH梯度等电聚焦电泳,第二向采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳),考马斯亮蓝R-350染色,以Image Master 2D V3.01 Elite软件进行图像分析。选取差异蛋白质点进行胶内酶解,以MALDI-TOF-MS测肽质量指纹图,检索Swiss-Port数据库,对蛋白质进行鉴定。 研究结果: 1.模型组与正常组比较,共鉴定出差异蛋白17个。在模型6h和24h组新出现的有:泛醇-细胞色素C还原酶铁硫亚单位;在模型6h和24h组均表达上调的有:3-磷酸甘油醛脱氢酶,泛素C-末端水解酶同功酶L1,谷胱甘肽S转移酶P,抗氧化蛋白2,组织型纤溶酶原激活物前体;均表达下调的有:热休克同源71 kDa蛋白,组氨酸三核苷凝结蛋白1,Cu-Zn超氧化剂物歧化酶,G蛋白β1亚单位。仅在模型6h组表达上调的有:电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1;表达下调的有:肌酸激酶,蛋白酶体β4。仅在模型24h组表达上调的有:1,6-二磷酸葡萄糖脱氢酶,成纤维细胞生长因子14;表达下调的有:果糖二磷酸醛缩酶C,二氢嘧啶酶关联蛋白2。初步构建了局灶性脑缺血大鼠基底节蛋白质组差异表达图谱。


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