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补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其相关基因表达的影响

夏天  
【摘要】:目的:补肾调冲方是导师韩冰教授根据中医理论及多年的临床实践所创立的,具有滋补肝肾、平衡阴阳、疏达肝气、调理冲任气血等功能,适用于肾虚、冲任失调所致的一系列卵巢功能失调性疾患的方药。本研究即以补肾调冲方作为干预手段,以体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞作为研究对象,运用直接给药法及血清药理学两种方法观察补肾调冲方对卵巢颗粒细胞增殖与甾体激素分泌功能的影响,并进一步研究中药对卵泡刺激素受体(FSHR)、类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、类胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等基因表达的影响,从而在卵巢一级水平探讨补肾调冲方调节卵巢功能的分子生物学机制,为补肾调冲方在临床上的推广应用提供理论依据。 方法:制备原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,预培养24小时后,直接加入FSH(50ng/ml)和/或不同浓度的补肾调冲方(100、10、1、0.1 μg/ml),同时根据血清药理学方法,用6周龄的未成年SD大鼠制备FSH及大、中、小剂量补肾调冲方含药血清,并设空白血清组,分别加入颗粒细胞培养体系中。细胞培养48小时后,用~3H—TdR掺入法及流式细胞术测定颗粒细胞的增殖变化及细胞周期分布,用放免法检测细胞培养液中E_2、P的含量以及细胞内cAMP的含量,并用半定量RT-PCR及实时荧光定量(Real-time)RT-PCR(SYBR GreenI)两种方法检测颗粒细胞FSHR、StAR、IGF-1 mRNA的表达量。 结果:1.补肾调冲方直接给药对颗粒细胞的作用:①可明显增加~3H—TdR掺入颗粒细胞DNA中的数量;②促使颗粒细胞由G_0/G_1期向S期转变,并可提高PI指数;③增加颗粒细胞E_2、P的分泌量;④增加颗粒细胞中cAMP的含量;⑤补肾调冲方对颗粒细胞增殖与分泌的作用在一定范围内随药物浓度的增大而增加,高浓度组与FSH作用相似;⑥补肾调冲方与FSH共同作用可进一步增强FSH促颗粒细胞增殖与分泌的作用,并进一步提高细胞内cAMP的含量。 2.补肾调冲方含药血清对颗粒细胞的作用:①明显促进基础状态下颗粒细胞的增殖与E_2、P的分泌,提高细胞中cAMP的含量;②大、中剂量补肾调冲方含药血清促颗粒细胞增殖与分泌的作用相似,与FSH血清组均无明显差别,小剂量中药血清组作用稍弱;③高雄激素状态下,颗粒细胞增殖与E_2、P分泌功能均受


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