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补肾调冲含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能与结构的影响

李沛霖  
【摘要】:目的:补肾调冲方是导师韩冰教授经多年悉心研究和临床实践,创立的治疗卵巢功能失调性疾病的方药。其临床疗效和对下丘脑—垂体—卵巢轴的调节效应已被以往的临床和实验研究所证实。本实验拟从卵巢水平入手,探讨中药补肾调冲方对卵巢卵泡生长、发育、成熟与闭锁的调控机制,了解该方体内代谢产物在调节卵泡微环境过程中所起的作用。 方法:用外源性激素孕马血清促性腺激素(PMSG)制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC),经预培养后,分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量补肾调冲方的药物血清在体外共同培养。收集培养液,采用放射免疫分析法测定其E_2、P、IGF-Ⅰ、TNF-α及cAMP的含量;收集颗粒细胞,运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况,及GC内凋亡相关基因Bcl-2、p~(53)的蛋白表达情况;应用透射电镜观察含药血清对颗粒细胞超微结构的影响。 结果:放射免疫结果显示,与正常对照组比较,中剂量补肾调冲含药血清能够显著提高GC分泌E_2的量(P0.05);各剂量含药血清均明显减低GC分泌P的量(P0.01);中剂量含药血清能够显著增加IGF—Ⅰ的分泌量(P0.05);中、低剂量含药血清可显著减少GC分泌TNF—α的量(P0.01);而各剂量含药血清对GC分泌cAMP无明显影响(P0.05)。 FCM结果显示,与正常对照组比较,各剂量补肾调冲含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P0.05),对其坏死率无显著影响(P0.05);各剂量含药血清都明显升调GC内凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达量(P0.05);同时各剂量含药血清组显著降调GC内促凋亡基因p~(53)的蛋白表达量(P0.01),且含药血清对Bcl-2、p~(53)的作用呈轻度负相关。 电子显微镜检查提示,与正常血清对照组比较,各剂量补肾调冲含药血清组的大部分细胞胞浆中脂滴体积较前者增大,滑面内质网更丰富,充满胞浆,扩张明显,线粒体数目增多,扩张显著,且中药剂量越高这一趋势越明显。


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