蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质

【摘要】：用DEAE-Cellulose-32离子交换柱层析部分纯化了大豆胰蛋白酶抑制剂,其分子量为20.1 kD,抑制比为0.9：1。用其为配基,以Sepharose-4B为载体,从赤子爱胜(?)(Eisenia foetida)匀浆液中亲和层析分离了蚯蚓纤溶酶的全组分。探讨了不同活化方法,如羰基二咪唑(CDI)活化法和环氧氯丙烷活化法对偶联率的影响,不同配基,如大豆胰蛋白酶抑制剂和卵清蛋白对亲和结果的影响,以及不同亲和时间、温度、缓冲液pH对亲和吸附的影响。环氧氯丙烷活化法比羰基二咪唑活化法偶联率高。以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基亲和层析可以得到约12个蚯蚓纤溶酶组分,而以卵清蛋白为配基亲和层析只能得到1个主要的蚯蚓纤溶酶组分。随亲和吸附时间的延长,吸附量逐渐增大,3小时吸附量达到饱和；随亲和吸附温度的升高,吸附量呈下降趋势,故亲和吸附应采用较低温度(5℃)；缓冲液pH对亲和吸附影响显著,当缓冲液pH在8.5-9.0时,亲和吸附量最大。 用DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析法和制备电泳法分离纯化了蚯蚓纤溶酶各单组分(8、9、10号组分为待研究目的组分),研究了这三个组分的生化及酶学性质。组分8、9、10都是有类胰蛋白酶活性的丝氨酸蛋白酶,都是糖蛋白,都能水解酪蛋白、纤维蛋白和BAEE。组分8含有2个亚基,分子量分别为25.5 kD和17.8 kD,具有纤溶酶原激活活性和类胰蛋白酶活性,无类糜蛋白酶活性,纯化的8号组分不具有抗胃蛋白酶水解的能力。组分9只含有一条多肽链,分子量为33.6 kD,组分10含有2个亚基,分子量分别为18.7 kD和10.9 kD。组分9和10都兼有纤溶酶原激活活性和直接纤溶活性,但以纤溶酶原激活活性为主,并兼有类胰蛋白酶和类糜蛋白酶活性。