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手性配体交换毛细管电泳方法发展及酶反应动力学的研究

齐莉  
【摘要】:手性分析在毛细管电泳(CE)研究领域中占有十分重要的地位,因此发展手性分析新技术和开拓新型手性选择剂一直是人们关注的热点。其中,手性配体络合物是一类已使用但目前尚未得到广泛和深入研究的新型CE手性选择剂,但目前可选用的使用体系很少,而且,可否将在线衍生技术及酶反应动力学研究与手性配体交换毛细管电泳(CLE-CE)技术相结合来开展微量生物样品的分析研究和酶反应动力学的研究,也存在着诸多疑问。因此,本论文针对这些问题,开展了比较系统的CLE-CE研究: 在第一部分,我们对CE在当前手性分析中的研究和应用(包括在线衍生CE技术及酶反应的CE研究技术)进行了综述,并介绍了其中主要的手性CE分析方法和主要的手性选择剂种类。之后,提出了我们本篇论文的研究思路。 在第二部分,以Zn (II)-L-氨基酰胺作为手性配体络合物,通过缓冲液pH值、络合物浓度和衍生温度的优化,最终采用CLE-CE方法分离了9对手性丹酰化氨基酸。 在第三部分,Zn(II)-L-精氨酸络合物被用作手性选择剂,结合在线衍生技术,发展了一种针对微量生物样品的CLE-CE分析方法。我们发现:衍生试剂进样方式、衍生反应时间和样品的引入量均会极大地影响在线衍生产率及手性分离效率。 在第四部分,发展了以Zn(II)-L-鸟氨酸络合物为手性选择剂的CLE-CE方法,经过条件优化后,分离了3对未衍生的芳香氨基酸对映体及4对衍生的氨基酸对映体。我们发现:该法可进一步用于酶反应动力学的研究中。 在第五部分,以Zn(II)-L-缬氨酸络合物及环糊精(CD)体系作为二元手性选择剂,以CLE-CE方法分离了20对手性丹酰化氨基酸。进一步开展的酶促反应研究结果表明:在线酶促反应时间、酶孵育温度及底物特性均会对酶反应动力学产生显著影响。 本论文的研究表明:以Zn(II)为中心离子的手性配体络合物是一类极具开发潜力的CE手性选择剂,它在氨基酸的手性拆分中表现出了优异的性能,同时,CLE-CE方法与在线衍生技术及酶促反应结合后,也拓展了其在衍生反应研究及酶促反应研究中的应用面。进一步对Zn(II)为中心离子的手性配体络合物的手性识别机理规律进行研究以便于开发设计出具有更广泛手性识别范围的CLE-CE体系,将是一项具有重要意义和广泛应用前景的工作。


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