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血小板对RA滑膜炎症和增生的影响及蛭元方干预研究

周蕾  
【摘要】:目的: 本研究通过观察血小板对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜炎症和增生的影响,来探讨蛭元方对活化血小板加剧RA大鼠滑膜炎症和增生的作用并研究其可能作用机制,为本方临床应用提供实验依据。 方法: 1、将常规培养的大鼠RSC364细胞随机分为正常组(N)和RA模型组(RA,0.5、1、2、5μg/L TNF-α)。先以激光共聚焦显微镜观测常规培养的RSC364细胞,并于400倍镜下拍照;再运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和噻唑蓝(MTT)法分别检测各实验组RSC364细胞培养上清中白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)的生成量及其增殖情况。 2、采用密度梯度离心的方法制备血小板,并以5μg牛II型胶原蛋白分别诱导其活化1h、5h和10h,运用ELISA法检测各实验组血小板上清中sP-选择素的表达情况;将常规培养的大鼠RSC364细胞随机分为:正常组(N)、RA模型组(RA)、非血小板活化组(NP)、活化血小板干预组(AP),参照分组情况,依次加入不同浓度TNF-α、未活化血小板及活化血小板,运用ELISA法和MTT法分别检测各组RSC364细胞上清中IL-6及IL-8的生成量及其增殖情况。 3、将常规培养的大鼠RSC364细胞随机分为正常组(N)、RA模型组(RA)、活化血小板干预组(AP)、蛭元方干预组(ZG),参照分组情况,依次加入不同浓度TNF-α、活化血小板、10%蛭元方含药血清,运用ELISA法分别检测RSC364细胞上清中IL-6、IL-8的生成量及血小板上清中sP-选择素的表达情况,采用MTT法观察RSC364细胞的增殖情况。 结果: 1、细胞形态学观察:常规培养的大鼠RSC364细胞呈长梭形,胞浆丰富,细胞外端有伪足伸出,排列较为不规则,符合成纤维细胞的形态学特点;在0.5、1、2μg/LTNF-α存在下,RA模型组RSC364细胞上清中IL-6和IL-8的生成量均明显增加,并呈现剂量依赖性,与同一浓度的正常对照组相比,均具有显著性差异(P 0.05);在5μg/LTNF-α存在下,RSC364细胞增殖率是10.93%,明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。 2、牛II型胶原蛋白活化血小板5h时,血小板上清中sP-选择素含量为142.30pg/mL,与1h和10h相比,5h时血小板s上清中P-选择素的含量最高,差异显著(P 0.05);与RA模型组相比,活化血小板干预组RSC364细胞生成IL-6和IL-8的量均明显增加(P 0.05和P 0.01),滑膜细胞增殖率为25.51%,亦明显升高(P 0.05)。 3、与血小板干预组相比,蛭元方干预组RSC364细胞的IL-6和IL-8生成量均显著降低(P 0.05和P 0.01),其增殖率为11.90%,亦有明显下降(P 0.05),血小板sP-选择素的表达量为42.80pg/mL,也显著降低(P 0.05)。 结论: 1、采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)干预RSC364细胞的方法,可实现体外建立RA大鼠细胞模型。 2、活化血小板能加剧RA大鼠滑膜细胞的炎症和增生反应。 3、蛭元方能有效缓解血小板对RA大鼠滑膜炎症及增生的促进作用,其机制可能与抑制P-选择素的表达有关。


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