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毛细管电泳测定虾肌肉中腺苷酸方法研究

王冬梅  
【摘要】: 毛细管电泳(CE)是当今最有效的分离技术之一,自八十年代初得到了 迅猛发展。毛细管区带电泳(CZE)和胶束电动毛细管色谱(MECC)已经用于 核苷酸分析,综述了毛细管电泳法测定核苷酸的影响因素和应用实例,讨 论了毛细管电泳法测定核苷酸的优势及存在的问题。 建立了胶束电动毛细管色谱测定腺苷酸的方法。分析使用TH-2型高效 毛细管电泳仪、48cm(有效长度37.5cm)×75μm I.D.毛细管,254nm在柱 紫外检测。首先在表面活性剂的浓度、电泳缓冲液的pH和电压方面进行了 优化,最佳分离条件是:50mmol/L磷酸氢二钠(Na_2HPO_4)+20mmol/L十六 烷基三甲基溴化铵(CTAB)+1mmol/L乙二铵四乙酸二钠(EDTANa_2)的电泳缓 冲液(pH8.0),-15KV的电压。三种腺苷酸在10min内得到高效分离,分 离度大于3。此方法用于虾肌肉中的腺苷酸测定,结果证明MECC为组织中 的腺苷酸分析提供了一个简单、快速、灵敏、可靠的方法。 把上述MECC测定腺苷酸的方法应用于日本沼虾蜕壳周期肌肉中能量变 化的研究。ATP浓度、TAN、AEC和ATP/ADP变化呈S-型,正蜕壳时最低, 蜕壳后24小时时最高(P<0.05)。在其它时期AEC变化幅度很小(0.86- 0.89)。ATP/ADP在晚蜕壳前期相对较高,这可能与此时腺苷酸激酶的平衡 常数极高有关(P<0.01)。腺苷激酶的平衡常数在晚蜕壳前期最高,在蜕壳 后24小时达到最低值,此后又有所升高并保持在相对稳定的水平。这些结 果说明在蜕壳周期中能量代谢发生了变化。


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