收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

蚯蚓金属硫蛋白的诱导及分离纯化

李冬  
【摘要】:金属结合蛋白是生物体内一类可特异地和金属结合的蛋白,在调节生物体内金属代谢等方面起着重要的作用,它在一定程度上具有可诱导性。因此,对于它的诱导、表达、代谢的生理过程的研究具有重要的意义。本文研究了蚯蚓体内对重金属代谢起主要作用的一类金属蛋白—金属硫蛋白(Metallothionein,MT)的诱导、纯化及鉴定。 经对比研究,确定了以80mg/L浓度的CdCl_2溶液对蚯蚓进行半浸泡诱导的方法,诱导48小时。对诱导前、后蚯蚓的生物学和蛋白质组成的变化进行研究。在进入CdCl_2溶液时蚯蚓反应剧烈,分泌大量黄色物质,诱导48小时后蚯蚓仍可存活。诱导前、后蚯蚓在蛋白质水平也发生较大变化,表现在:小分子量蛋白含量差异较明显;诱导组比对照组巯基蛋白的相对含量高出4倍;紫外扫描图谱显示,诱导后的蚯蚓MT粗提液高于对照组样品。经石墨炉原子吸光分光光度计检测,诱导后蛋白样品的Cd含量比对照组高21%,表明使用80mg/L的CdCl_2诱导蚯蚓的金属硫蛋白是有效的,Cd~(2+)在蚯蚓体内产生了积累。 使用结合有Cu~(2+)的金属螯合亲和层析柱对粗提蛋白液进行了初步的分离,分离液进行SDS-PAGE,根据分子量确定MT在凝胶上的位置,再使用电泳洗脱的方法对其进行纯化,并通过测定纯化样品的分子量和紫外吸收峰对其相应的理化性质进行了鉴定。 研究发现,金属硫蛋白分子量低于14.4kD。蛋白粗提液与巯基试剂反应15min后的样品,在400nm附近出现吸收峰,诱导组吸收峰略高于对照组,但并不明显。纯化后的样品在酸性条件下进行紫外扫描,190nm处有两个吸收峰,可能为蚯蚓金属硫蛋白的两个组分:MT-1和MT-2。 纯化过程中对咪唑—ZnCl_2染色法进行改进,引入了极少量考马斯亮蓝,提高了染色灵敏度和染色速度,且蛋白质没有被化学修饰,可在较短时间内进行蛋白质回收。 本文的结果为下一步研究金属硫蛋白的作用机理及代谢过程奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨利荣;张敏红;;金属硫蛋白与应激反应[J];动物营养学报;2011年07期
2 梁晓峰;龚映雪;肖文娟;胡佳;郑阳阳;张小洪;王峻梅;刘泽寰;;酿酒酵母金属硫蛋白的表达、纯化及活性检测[J];兰州大学学报(自然科学版);2011年03期
3 蒋利萍;李晶;宋明江;唐正义;;赤子爱胜蚓对镉、铅富集作用的初探[J];内江师范学院学报;2011年06期
4 武贤莉;黄红琼;杨毅;唐正义;;除草剂对蚯蚓CAT和SOD活性的影响[J];内江师范学院学报;2011年06期
5 代勋;龚明;;植物金属硫蛋白在植物抗逆性中的作用[J];宁夏师范学院学报;2011年03期
6 赵学平;王彦华;吴声敢;俞瑞鲜;吴长兴;陈丽萍;苍涛;王强;;10种常用农药对赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)的急性毒性效应[J];生态毒理学报;2011年04期
7 陈春;周启星;;蚯蚓金属硫蛋白定量PCR检测方法及其分子诊断[J];中国环境科学;2011年08期
8 张蕊媛;杨竞;刘欣;;五氯苯酚的生态毒性效应及其遗传毒性[J];生态毒理学报;2011年03期
9 舒迎花;马洪辉;杜艳;王建武;;Bt玉米秸秆杀虫蛋白对赤子爱胜蚓酶活性的影响[J];应用生态学报;2011年08期
10 李辉龙;雷震;吴尔苗;胡艳;吴石金;;1,2,4-三氯苯对蚯蚓生长和表皮及肠道超微结构的影响[J];生态毒理学报;2011年03期
11 朱江;李志刚;杨道丽;毛俊亚;;Hg对赤子爱胜蚓的急性毒性效应研究[J];上海应用技术学院学报(自然科学版);2011年02期
12 程果;徐晟;肖湘;李文平;;蚯蚓有效成分分离提纯技术及药理作用研究进展[J];经济动物学报;2011年02期
13 杨大佐;周一兵;陈雪;周笑孝;王斌;袁秀堂;孙静波;;双齿围沙蚕金属结合蛋白(MPⅡ)基因克隆与表达[J];中国水产科学;2011年05期
14 吉萍;牛明福;邵勇;高丽华;胡显文;;乙型肝炎病毒PreS2蛋白研究进展[J];生物技术通讯;2011年04期
15 安立会;郑丙辉;王静波;张雷;李子成;付青;王春燕;赵兴茹;陈浩;王丽靖;尚晶晶;;重金属暴露铜锈环棱螺全组织均一化cDNA文库构建及表达序列标签特征分析[J];生态毒理学报;2011年03期
16 关向杰;杨海君;盛博文;黄水娥;;典型环境污染物修复基因工程菌的构建及应用[J];生物技术通报;2011年09期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 董彬;王慧;曾勇庆;;金属硫蛋白(MT)基因的表达与肉猪的健康生长[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
2 郭家彬;付泽;雷蕾;彭双清;;金属硫蛋白抗阿霉素心肌毒性的线粒体机制研究[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
3 文镜;赵建;毕欣;张东平;金宗濂;;金属硫蛋白抗亚急性辐射的实验研究[A];中国营养学会第五次营养资源与保健食品学术会议论文摘要汇编[C];1999年
4 王文慧;张宝旭;路雪艳;李林峰;;金属硫蛋白的光保护作用:金属硫蛋白基因敲除小鼠对UVB照射的反应[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
5 师绿江;尹昭云;洪欣;辛益妹;贺鹏飞;任宏伟;韩行湛;关景芳;;金属硫蛋白对加速度致心肌细胞凋亡的影响[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年
6 蒋与刚;刘佃辛;葛玉章;韦京豫;郭长江;高兰兴;;金属硫蛋白对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用研究[A];中国营养学会第六届微量元素营养学术会议论文摘要汇编[C];1999年
7 郭军;辛银玲;向娟;周飞艨;;SECM-SPR联用技术研究金属硫蛋白构型变化[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(下册)[C];2006年
8 于东宁;覃凤均;孙永华;程时;;锌-金属硫蛋白对大鼠皮肤烫伤创面的影响[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
9 周忠良;唐思贤;王音;周菊珍;;河川沙塘鳢Odontobutis potamophila(Gunther)金属硫蛋白的诱导和分离[A];动物学专辑——上海市动物学会1996年年会论文集[C];1996年
10 何冰;郭军华;徐卓立;雍政;茹丙根;;利用蛋白质芯片技术分析有机硒诱导金属硫蛋白对肺纤维化进程中的影响[A];2003全国中青年药理学英文学术报告会论文摘要汇编[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈伟强;心理应激条件下脑金属硫蛋白的表达及其调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
2 刘秋菊;金属硫蛋白拮抗血管紧张素Ⅱ/p53通路诱导的心肌细胞凋亡的体内体外研究[D];吉林大学;2010年
3 蓝荣培;金属硫蛋白保护肾脏缺血/再灌注损伤及对免疫系统的影响[D];复旦大学;2004年
4 师绿江;金属硫蛋白对+Gz暴露大鼠心肌损伤保护作用及其机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
5 王清路;嗜热四膜虫金属硫蛋白MTT1和MTT2的结构与功能分析[D];山西大学;2012年
6 黄志勇;汞结合金属硫蛋白表征方法和铅同位素比值电感耦合等离子体质谱测定方法的研究[D];厦门大学;2003年
7 金淑梅;水稻类金属硫蛋白(rgMT)基因功能解析及对苜蓿的遗传转化研究[D];东北林业大学;2006年
8 刘月明;人新基因EOLA1生物学特性及相互作用蛋白研究[D];第三军医大学;2004年
9 郑起;人脑金属硫蛋白MT3结构对其性质和功能的影响[D];复旦大学;2004年
10 常秀丽;应答蛋白基因表达在镉接触中作为生物标志物的研究[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李冬;蚯蚓金属硫蛋白的诱导及分离纯化[D];河北大学;2006年
2 李忠义;不同应激因子对小白鼠肝脏金属硫蛋白合成的影响[D];湖南农业大学;2003年
3 高燕;利用蛋白质芯片技术探索肺纤维化早期标志物及硒代金属硫蛋白的防护作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
4 吴力专;Zn-金属硫蛋白间接竞争型ELISA的建立与应用[D];湖南农业大学;2004年
5 李小龙;金属硫蛋白锌诱导合成及其在杜长大杂交猪和杂种野猪体内代谢规律的研究[D];湖南农业大学;2003年
6 张小河;金属硫蛋白-3基因转染对食管癌细胞株增殖活性的影响[D];河北医科大学;2010年
7 李琳;金属硫蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[D];吉林大学;2005年
8 乔会珍;MT-4和MT-1X基因单核苷酸多态性与2型糖尿病的关联性研究[D];吉林大学;2006年
9 胡楠;香烟引起的心力衰竭机制及金属硫蛋白对小鼠心肌的保护研究[D];河北农业大学;2011年
10 李翠杰;植物金属硫蛋白拟南芥细胞表达与抗重金属能力研究[D];东北林业大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 孙英威 呼涛;我国成功获取金属硫蛋白[N];中国乡镇企业报;2003年
2 罗梅;适量饮用茅台酒有益于健康与金属硫蛋白有关[N];贵州日报;2005年
3 孙国根;人群中存在镉中毒易感人群[N];健康报;2008年
4 王松;基因破译国酒茅台[N];中华工商时报;2005年
5 孙国根王春;应对镉接触者“易感”筛选[N];科技日报;2008年
6 三水;“五元一次方程”解读茅台[N];中华工商时报;2004年
7 刘艳;基因破译国酒茅台[N];中国质量报;2005年
8 山西农业大学动物科学院 刘强;奶牛对微量元素铜的营养需要研究[N];中国畜牧兽医报;2008年
9 孙贵方;镉中毒易感人群[N];医药养生保健报;2008年
10 李焕荣;肝纤维化和肝硬化的防治[N];中国医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978