中华绒螯蟹雄性生殖细胞体外培养的研究

【摘要】：雄性生殖细胞体外培养的研究是生殖生物学研究领域的一个热点。目前,哺乳动物生殖细胞的体外培养已经取得巨大的进展,基本实现了体外培养中精原细胞的增殖分化,精母细胞经减数分裂分化为精细胞的过程。但是体外培养中尚未实现精细胞分化为精子的过程。 相对于哺乳动物的细胞培养,甲壳动物细胞培养开始的比较晚,并且培养主要集中于虾类血淋巴、心脏和卵巢,而对增殖能力较强的精巢体外培养研究的报道较少。 本文以中华绒螯蟹雄性生殖细胞为研究对象,以细胞的贴壁率、存活率和RNA/DNA比值为生理和生化指标,分别测定了几种不同渗透压(600,700,800,900,1 000,1 100 mmol/L)和pH值(6.8,7.0,7.2,7.4,7.6,7.8)条件下体外培养雄性生殖细胞的生长状况。指出1 000 mmol/L为培养细胞的最适渗透压,在此渗透压条件下,培养细胞的贴壁率、存活率、RNA/DNA最大。培养细胞的适宜pH范围是7.2-7.4,在此pH条件下,细胞的贴壁率、存活率、RNA/DNA均较大。 在此基础上,观察了细胞培养和组织培养中细胞的生长情况。实验发现,细胞培养中细胞的存活时间短,分裂能力低；组织培养中,细胞的存活时间较长,分裂增殖能力强,且能形成以组织块为中心的局部单层。 另外,本文研究了添加摘除中华绒螯蟹眼柄血淋巴对体外培养的雄性生殖细胞的影响。结果表明,摘除眼柄48 h后的血淋巴能促进细胞的生长,RNA/DNA值最大,但不能启动和促进细胞的分裂,与摘除24 h、0 h的血淋巴没有统计意义上的区别。