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提高毛细管电泳表征中药材重现性的方法研究

盖丽娟  
【摘要】: 中草药具有毒副作用小、疗效独特等优点,在最近几十年,受到人们的广泛关注。近年来,借助于现代生命科学、分析科学的进步,中药的研究水平和质量标准水平有了明显的提高。中药的检测方法由最初的薄层分析法发展为气相色谱法、高效液相色谱法、红外光谱法、核磁共振法、质谱法等。毛细管电泳因其优越的分离能力,在天然药物复杂物质体系的分离分析中也发挥着重要作用。在优化的毛细管电泳条件下可实现尽可能多的植物药物质信息的仪器信号表征,为植物药品质鉴定提供了一种可供选择的新手段。但是由于毛细管电泳迁移时间重现性差,在复杂样品定性表征中还有一定困难。本文将迁移时间归一化法应用在大黄的定性鉴定中,恒定电流-双峰校正法应用于黄芩的定性鉴定中,双峰-电流突跃法应用于白芍的定性鉴定中,以上三种方法与毛细管电泳优越分离能力的结合,有望使毛细管电泳技术在中药指纹图谱研究中发挥重要作用。全文共分为四章: 第一章:绪论。从中药质量控制的必要性及其检测方法、毛细管电泳的优点及其在中药研究中的应用、提高毛细管电泳重现性的方法三个方面进行了论述。重点介绍了提高毛细管电泳重现性的方法。 第二章:探讨了迁移时间归一化法改善中药毛细管电泳分析迁移时间重现性的原理,并将其应用于实际样品分析。迁移时间归一化法认为在相同的操作电压、缓冲液组成和温度条件下各次电泳运行的迁移时间差别主要归结为电渗流的差别。通过选择电泳谱图中的一个峰作为标记峰,将各次电泳运行的迁移时间都归一到第一次电泳运行时得到的迁移时间。考察了胶束电动色谱模式下中药大黄迁移时间的重现性,并将迁移时间(t)的RSD,单峰归一化迁移时间(t')的RSD,传统迁移时间比校正法(t/tm,m代表所选择的标记组分)的RSD进行了比较,发现RSD(t') RSD(t/tm)<RSD(t)。还考察了不同溶剂体系中大黄样品在毛细管区带电泳模式下的迁移时间,结果均表明,迁移时间归一化法能有效地提高中药大黄迁移时间的重现性,有望在中药毛细管电泳表征方面发挥更大作用。 第三章:将恒定电流分离模式、恒定电流-双峰校正法应用于毛细管电泳分析中药材黄芩中,分别对河北黄芩一天之内12次电泳实验中迁移时间相对标准偏差(RSD)及不同产地黄芩迁移时间的重现性进行了考察。并与传统恒定电压分离模式和迁移时间归一化法进行了比较。发现河北黄芩在恒定电压分离模式得到的迁移时间RSD在15.46%以上;采用恒定电流分离模式得到的迁移时间RSD均小于1.39%;恒定电流-双峰校正得到的迁移时间RSD均在0.16%以内。不同产地黄芩经单峰校正和迁移时间比法得到的迁移时间RSD相当,而恒定电流模式得到的迁移时间RSD波动较小,均在1%左右;恒定电流-双峰校正结果更加理想。结果表明,恒定电流分离模式及恒定电流-双峰校正法比恒定电压分离模式更能有效地提高毛细管电泳的重现性,在中药定性鉴定中发挥重要作用。 第四章:对双峰校正法进行了改造,引入了电流信号突跃,把电流信号突跃对应的迁移时间当做双峰校正中一个内标峰的迁移时间,减少了选两个内标峰带来的麻烦。对白芍天内、天间毛细管电泳数据以及不同产地白芍毛细管电泳数据进行了校正。大多数情况下,校正前迁移时间RSD2.3%,校正后迁移时间RSD0.4%。最佳处理效果为处理后的0.12%比处理前的3.04%改善25倍。结果表明,双峰-电流信号突跃校正法在复杂样品基质迁移时间的校正中能够起到非常好的效果。


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