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头孢霉DT06多糖提取及抗氧化性测定

陈建文  
【摘要】:头孢霉DT06是单细胞蓝藻Chroococcus.sp.的共生真菌,除产生抗生素还产出一定量的胞内和胞外多糖。真菌多糖具备广泛的生物活性具备显著的药理作用,有着无毒无副作用等优点,是近年来研究的热点。本实验的目的确定多糖制备和提取的最佳条件,测定胞外胞内多糖的抗氧化性。本实验研究内容如下: 头孢霉DT06胞外多糖的制备,提取和抗氧化性的测定:本实验分别以PDA培养基,查氏培养基和沙氏培养基作为发酵培养基,不同温度下培养5-7天,并使用95%乙醇沉淀得到胞外多糖粗品,纯化后根据所得胞外多糖量的大小,确定了发酵的最适条件,即查氏培养基在30oC下培养7天,所得胞外多糖含量为2.11±0.2(g/L)。抗氧化性的表征,测定多糖对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O2·-)的清除率,同时对比除蛋白前后清除率,多糖的清除率分别为43.80%,47.68%。 头孢霉DT06脂溶性和水溶性提取物抗氧化性的分析:本实验对比来自不同培养基所得菌丝的脂溶性和水溶性物质的抗氧化性,为下一步胞内多糖的研究提供理论依据。菌丝破壁后使用蒸馏水和不同浓度的甲醇,乙醇分别进行提取,并对提取液进行抗氧化性表征,实验表明30oC水提条件下,对羟基自由基的清除率最高,可达88.0%。 头孢霉DT06胞内多糖的制备提取和抗氧化性的测定:本实验通过对比在不同发酵条件下所得的菌丝量大小及所得胞内多糖含量确定胞内多糖的最佳发酵条件,得最大生物量为9.03±0.4g。在提取过程中找到最佳的提取条件和方法,头孢霉菌丝体的烘干温度为40oC,破壁方法为超声破壁,通过单因子实验和正交试验,确定最优热提条件:提取温度90oC,热提时间6h,乙醇含量95%,乙醇沉淀时间4h,胞内多糖最大含量为6.02±0.3%(w/w)。清除羟基自由基为54.20%,清除超氧阴离子为51.04%。 通过对比胞内外多糖的含量和抗氧化性的强弱,表明在单次发酵的条件下,所得胞外多糖的量高于胞内多糖,同时在抗氧化性方面,胞内多糖略高于胞外多糖。由此得出,头孢霉DT06不但是功能性多糖的潜在来源,同时多糖可发展并代替菌丝体在医药保健方面的作用。


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