线粒体与内质网应激在压疮中的作用机制

【摘要】：目的探讨线粒体与内质网应激在大鼠压疮发生中的作用机制,线粒体及内质网应激的作用及其介导凋亡的情况,进一步了解压疮的病理机制,为有效预防及治疗压疮提供新的靶点及依据。方法根据国内姜丽萍等人研究的大鼠压疮模型建模。将40只雄性Wistar大鼠按照随机数字表方法分为5组,对照组(Control组后称Con组)、受压三个循环组(3circle组,后称3C)、受压六个循环组(6circle组,后称6C组)、受压九个循环组(9circle组,后称9C组)、受压十二个循环(12circle组,后称12C组),每组8只。实验终点时脱颈法处死大鼠并取受压肌肉组织进行检测。HE染色,光镜观察各组受压组织的形态学变化;透射电镜观察各组受压肌肉组织的超微结构的变化;免疫印迹法(Western blot法)检测内质网应激伴侣蛋白78(GRP78)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(caspase-12)的表达情况和线粒体相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况;免疫组织化学法观察并分析GRP78、caspase-12情况。数据采用SPSSl7.0系统进行统计分析,计量资料采用均数±标准差()进行描述,组间差异性比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),以P0.05为有统计学意义。sx?结果1HE染色显示与受压组相比正常对照组,形态正常,肌纤维完整、排列整齐;随着循环周期的延长受压组逐步出现退化的病理变化,表现为肌纤维排列紊乱出现少量的碎片,出现炎症细胞浸润逐渐加重,肌纤维出现溶解,断裂,空泡变性等病理改变。2透射电镜显示对照组肌纤维组织排列整齐紧密,间隙中可见形态正常且完整的线粒体;随循环周期的延长受压组织骨骼肌细胞出现了广泛的线粒体损伤,线粒体排列紊乱,嵴消失,水肿,或成空泡样变性,内质网扩张明显。3Western blot显示受压各组GRP78表达均高于对照组且;而caspase-12与对照组相比只有6C、9C、12C时显著升高,提示循环周期数的增多内质网损伤和其介导的凋亡越严重。同时,能够反映细胞凋亡的Bcl-2/Bax值显示,与对照组相比3C组略有增高,但没有统计学差异;而6C、9C、12C组Bcl-2/Bax值显著减小且呈递减趋势。4免疫组化结果显示在各组中,GRP78的表达与Con组相比3C组,6C组,9C组和12C组的表达均明显增加(P0.05),但6C、9C、12C组的表达较3C组的表达有一定程度的降低且有统计学意义(P0.05)。而caspase-12蛋白的表达,与Con组比较3C组增加不显著,(P0.05);6C组,9C组,12C组与Con组相比均升高明显,且有统计学意义(P0.05)。结论1在大鼠压疮发生过程中激活了内质网应激(GRP78)及其介导的凋亡(caspase-12);2在大鼠压疮发生过程中引起了线粒体的损伤和其介导的凋亡。