收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

兔骨髓间充质干细胞体外构建血管化组织工程心肌的实验研究

韩刘君  
【摘要】:目的利用兔骨髓间充质干细胞作为种子细胞,分别诱导为心肌样细胞和内皮细胞,于体外构建血管化组织工程心肌组织,为临床上通过组织工程与细胞移植技术治疗心肌梗死这一疾病提供理论基础和技术支持。方法1选取普通级日本大耳白兔,无菌分离双侧股骨及胫骨,采用Percoll分离液分离兔骨髓间充质干细胞并使用流式细胞仪鉴定其表面标志物CD90、CD105和CD45。使用内皮细胞条件培养基(Endothelial cell culture medium,ECM)对兔骨髓间充质干细胞诱导为内皮细胞,采用免疫细胞化学染色的方法对表面标志物CD34和CD31进行鉴定。显微镜下观察兔骨髓间充质干细胞和内皮细胞的形态学变化。2使用5-氮胞苷对兔骨髓间充质干细胞定向诱导为心肌样细胞,免疫细胞化学染色的方法对表面标志物心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,c TNT)进行鉴定,并于显微镜下观察诱导后细胞的形态学变化。3分别使用4,6-二氨基-2-苯基吲哚(4,6-diamino-2-phenylindole,DAPI)和氯甲基苯甲酰氨(Chloromethylbenzamidodialkylcarbocyanine,CM-DIL)标记心肌样细胞和内皮细胞。4将诱导后获得的心肌样细胞与内皮细胞按照不同比例进行共培养(1∶0、0∶1、1∶1、1∶2)。5将不同组的细胞接种至Matrigel基质胶和胶原海绵两种支架材料上,观察细胞-支架材料复合物的血管化形成能力。6采用SPSS 23.0统计软件对实验数据进行统计学分析,计量资料使用均数±标准差(sx±)的形式表示,多个样本的均数之间的比较采用单因素方差分析,以P0.05表示具有显著性差异。采用Graph Pad Prism 8.0软件进行图形的绘制。结果1通过流式细胞仪技术检测可观察到使用Percoll分离液的方法可获得兔骨髓间充质干细胞,CD90和CD105表面标志物呈现为阳性表达,CD45为阴性表达,显微镜下可观察到48小时的兔骨髓间充质干细胞形态为透亮圆形、折光性较强,第1代的兔骨髓间充质干细胞,细胞长短伸展不一,形态多为短梭形,内含少量杂质细胞,第2代的兔骨髓间充质干细胞,细胞呈现为梭形,第3代的兔骨髓间充质干细胞,细胞体积较起始细胞体积大,形态变为长梭形,多边形。2使用内皮细胞条件培养基(ECM)对兔骨髓间充质干细胞诱导后可获得内皮细胞,经免疫细胞化学染色的方法进行鉴定,结果表明诱导后的细胞表达CD31和CD34,显微镜下可观察到内皮细胞在48小时后部分细胞开始贴壁,细胞形态大小不一致,呈现条索样变化;传至第1代时,细胞形态变为短小细条索状,有少许透亮点;待细胞进行第2次传代,可观察到细胞数量较前明显增多,排列为“铺路石样”改变;传至第3代,细胞为长梭形改变。3 DAPI荧光染料标记心肌样细胞,可观察到细胞核标记为蓝色,CM-DIL荧光染料标记内皮细胞,可观察到细胞膜标记为红色。4使用10umol/L的5-氮胞苷对兔骨髓间充质干细胞定向诱导为心肌样细胞,经免疫细胞化学染色的方法进行鉴定,观察到诱导后的细胞心肌标志物c TNT表达为阳性,经5-氮胞苷诱导24小时的细胞形态呈现为多角形,分布不均,生长缓慢,诱导3天后,细胞体积较前增大,诱导5天后,细胞开始伸出长短不一的伪足,诱导7天后细胞伸出明显伪足,偶有相互连接,细胞胞体呈现为高亮状态,诱导3周,细胞之间聚集数量逐渐减少,诱导1月可观察到细胞形态发生明显变化,细胞数量明显减少。5体外构建细胞-支架材料复合物,将不同组别的细胞接种至Matrigel基质胶上,可观察到心肌样细胞与兔骨髓源性内皮细胞以1∶2共培养条件下的血管网状结构的形成能力最强,而在胶原海绵支架材料上只观察到细胞在胶原海绵生长,无血管网状结构的形成。结论1使用内皮细胞条件培养基诱导兔骨髓间充质干细胞可获得内皮细胞。2 5-氮胞苷诱导兔骨髓间充质干细胞可获得心肌样细胞。3体外构建血管化细胞-支架材料复合物,支架材料的选择上Matrigel基质胶相比较胶原海绵更合适。4细胞-支架材料复合物形成血管化的能力上,心肌样细胞与内皮细胞以1∶2比例进行共培养条件下的血管网状结构的形成能力最强。图15幅;表2个;参118篇。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前18条
1 方佩斐;贾维敏;;组织工程中天然支架材料的研究现状[J];医学文选;2006年04期
2 孙尧;何玉兰;于晓龙;程燕;宋博毅;;体外构建血管化组织工程心肌[J];解剖学杂志;2015年03期
3 信更新;刘毅;;组织工程多孔支架的构建方法[J];中国美容整形外科杂志;2018年08期
4 刘利;万涛;;肝组织工程的研究概况[J];生物医学工程研究;2006年03期
5 戴芳;宋莉;;骨髓间充质干细胞与相关载体的联合应用及调控[J];南昌大学学报(医学版);2010年02期
6 张其清,张立海,马东瑞,袁歆,刘玲蓉;组织工程及其支架研究进展和面临的问题及展望[J];基础医学与临床;2001年06期
7 李晓英;;组织工程及研究进展[J];河南医学研究;2008年04期
8 张晨;高景恒;;应对组织工程带来的挑战[J];中国美容整形外科杂志;2007年04期
9 万涛;刘利;;肝组织工程的影响因素[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年06期
10 杨志明;组织工程的发展趋势[J];中国修复重建外科杂志;2003年02期
11 张斌;黄富国;;骨骼肌成肌细胞移植研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年08期
12 ;本刊组织构建栏目已出版“组织工程与血管化”研究的相关文章[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年11期
13 白利明;陈鸿辉;;组织工程前交叉韧带的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2007年02期
14 杨亚冬;张文元;房国坚;;组织工程韧带/肌腱支架材料的研究进展[J];浙江实用医学;2012年01期
15 随蓓蓓;;组织工程载体支架材料研究进展[J];科协论坛(下半月);2013年05期
16 王晓伟 ,徐志云 ,张宝仁;组织工程心脏瓣膜的研究进展[J];第二军医大学学报;2003年12期
17 王瑞芳;秦书俭;;血管化在成骨过程中的作用[J];华北煤炭医学院学报;2007年06期
18 谢成婕,王贻宁;种植体牙周膜组织工程支架材料的研究现状[J];中国口腔种植学杂志;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 辛培成;;纤维蛋白凝胶为代表的支架材料在组织工程中的应用进展[A];第21届中国康协肢残康复学术年会暨第二届“泰山杯”全国骨科青年科技创新论坛论文摘要[C];2012年
2 黄艳;易阳艳;;可注射型支架材料在组织工程脂肪中的应用[A];2015江西省首届医学美容整形联合学术会议、江西省医学会第十一次医学美学与美容学术研讨会、江西省第四次中西医结合医学美容学术会议论文汇编[C];2015年
3 任杰;;组织工程用支架材料研究进展[A];2005年上海市医用生物材料研讨会论文汇编[C];2005年
4 罗旭松;周广东;刘伟;张文杰;岑莲;曹谊林;;体内外联合培养提高组织工程管状软骨构建质量[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
5 张钟;孙正宇;李箭;;组织工程韧带的研究进展[A];第二十四届中国中西医结合骨伤科学术年会论文汇编[C];2017年
6 姬瑞娟;黄超;陈磊;熊绍虎;刘芳;张喜;张传森;李玉泉;杨向群;;组织工程心脏起搏器的体外构建[A];中国解剖学会2015年年会论文文摘汇编[C];2015年
7 冯优;王凤山;王秀云;;透明质酸与组织工程[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
8 杨志明;;组织工程发展趋势及展望[A];第三届全国口腔颌面部创伤暨修复重建学术研讨会论文汇编[C];2003年
9 顾晓松;;组织工程神经的研究进展[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
10 李娜;张西正;吴金辉;;组织工程中应变对骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响[A];天津市生物医学工程学会2004年年会论文集[C];2005年
11 ;科学家首次打印出“会呼吸”的肺[A];《科学与现代化》2020年第一季度[C];2020年
12 樊瑜波;;组织工程生物反应器的生物力学[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
13 樊瑜波;陶祖莱;;组织工程生物反应器的生物力学[A];中国力学学会学术大会'2005论文摘要集(上)[C];2005年
14 迟宝荣;孟祥伟;孙艳;胡春光;姜金兰;;组织工程肝构建的实验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
15 曹谊林;崔磊;商庆新;刘伟;;组织工程的研究现状与应用展望[A];首届全国医疗器械学术与产业论坛论文集[C];2002年
16 张岚;吴苗琴;;组织工程黏膜培养体系建立的研究[A];2008年浙江省眼科学术会议论文集[C];2008年
17 俞斌;卢慕峻;王忠;周广东;刘伟;曹谊林;;组织工程尿道黏膜的体外构建[A];2007年华东六省一市泌尿外科学术会议暨山东省泌尿外科年会论文汇编[C];2007年
18 杨雪菲;靳文静;郑学晶;;具有互贯穿网络结构的高强度微纤化纤维素胶原复合水凝胶[A];中国化学会第一届全国纤维素学术研讨会论文集[C];2019年
19 刘武祥;吴佳钉;陈伟;梁鑫;杨检群;古汤汤;;空调室外机电机支架强度优化研究[A];2020年中国家用电器技术大会论文集[C];2020年
20 秦德生;常晓峰;陈静波;靳永军;;某车型PTC支架强度分析及优化改进[A];第十六届河南省汽车工程科技学术研讨会论文集[C];2019年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 高峰;组织工程补片修补犬腹主动脉的实验研究[D];中国协和医科大学;2003年
2 马英智;利用人表皮干细胞和人真皮成纤维细胞体外构建组织工程复合皮肤的研究[D];吉林大学;2009年
3 闫洪涛;准静态平面均匀流场结构条件的优化及组织工程真皮和游离皮片培养效果的初步评价[D];中国人民解放军陆军军医大学;2019年
4 李越;新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用[D];中国人民解放军陆军军医大学;2019年
5 郭奇;新型组织工程神经体外构建、修复大鼠坐骨神经缺损效果的研究[D];吉林大学;2018年
6 高艳菲;基于气流加捻的电纺纳米纤维纱及组织工程应用[D];天津工业大学;2018年
7 金一鹏;3D生物打印技术辅助构建组织工程尿道研究[D];中国人民解放军医学院;2018年
8 李大伟;基于静电纺纤维/纱线三维大孔支架的制备及其在组织工程中的应用[D];东华大学;2017年
9 陈元维;组织工程支架材料及其降解产物血管化功能的体外研究及表征方法的建立[D];四川大学;2007年
10 杨家骥;人脐静脉内皮细胞构建血管化组织工程真皮的研究[D];第四军医大学;2008年
11 张平川;可注射的组织工程心肌治疗心肌梗死的实验研究[D];中国协和医科大学;2006年
12 徐奕昊;3D打印技术辅助精细化构建组织工程鼻翼软骨的研究[D];北京协和医学院;2014年
13 汪黎明;组织工程方法构建血管移植物的实验研究[D];中国协和医科大学;2004年
14 刘源岗;新型自控降解壳聚糖基组织工程支架材料的制备与性能[D];暨南大学;2006年
15 李雪雯;双缓释PDGF-bb、BMP-6的nHA/Gel-GMS支架复合BMMSCs修复大鼠颅骨临界骨缺损的实验研究[D];中国医科大学;2019年
16 刘峰;一种基于人体CT影像数据设计的新型自膨式静脉支架的临床前研究[D];中国人民解放军医学院;2019年
17 王为;三维培养体系中周期性压力对骨髓间充质干细胞与壳聚糖/丝素蛋白/纳米羟基磷灰石多层支架复合体的促成软骨分化效应[D];华中科技大学;2019年
18 徐江;冠状动脉支架断裂的力学机理研究[D];西南交通大学;2018年
19 张然;负载BMP-9的nHA/ColⅠ/MWCNT支架用于大鼠骨缺损修复的实验研究[D];中国医科大学;2019年
20 叶鹏;负载抗生素SF/CS/nHA骨组织支架联合BMSCs修复骨缺损的实验研究[D];南方医科大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 韩刘君;兔骨髓间充质干细胞体外构建血管化组织工程心肌的实验研究[D];华北理工大学;2020年
2 姜明;构建可促进血管化的组织工程真皮的研究[D];第四军医大学;2004年
3 金芳;富血小板血浆在组织工程骨血管化方面的研究[D];泸州医学院;2010年
4 刘利;高分子肝支架材料半乳糖化壳聚糖的制备和研究[D];武汉理工大学;2007年
5 张悦;荧光蛋白标记牙组织工程的体内实验研究[D];新疆医科大学;2016年
6 吴邦耀;新型组织工程神经支架材料的生物安全性评价[D];第四军医大学;2008年
7 陈佩;植物源性组织工程角膜上皮载体的开发与应用研究[D];厦门大学;2017年
8 黄孟杰;3D打印肝单元结构与细胞生长的关联性研究[D];杭州电子科技大学;2018年
9 项桦;基于细胞膜片技术构建组织工程真皮的体外研究[D];兰州大学;2018年
10 刘洋;自体尿源性干细胞结合3D多孔小肠粘膜下基质用于兔尿道重建的实验研究[D];重庆医科大学;2017年
11 李晓玉;脱细胞血管支架的制备及构建组织工程胆管的研究[D];河南科技大学;2017年
12 胡顺鹏;新型胶原真皮支架材料的制备与性能表征[D];山东大学;2010年
13 江莹;组织工程韧带的初步研制[D];四川大学;2006年
14 刘玮健;组织工程用梯度支架材料的制备与表征[D];北京化工大学;2006年
15 史培良;用组织工程的方法构建组织工程骨的实验研究[D];第四军医大学;2001年
16 何玉兰;体外构建血管化组织工程心肌的研究[D];河北联合大学;2014年
17 张永光;皮质骨Ⅰ型胶原的提取及胶原—明胶神经修复支架材料的制备[D];第四军医大学;2009年
18 齐贵新;组织工程用高分子支架材料的研制及实验研究[D];中南大学;2006年
19 赵洪智;矮塔斜拉大桥0~#块支架有限元数值模拟分析[D];南华大学;2018年
20 刘丹;京尼平交联法改善大鼠肾支架的生物学性能[D];南华大学;2019年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 器审中心审评三部 张书培 史新立;组织工程医疗产品监管方式初探[N];中国医药报;2018年
2 田进;世界首例组织工程再生骨修复大段骨缺损技术获成功[N];陕西科技报;2017年
3 综合;南通大学开展“干细胞与组织工程”研究[N];江苏科技报;2010年
4 毕东海;组织工程前瞻[N];浙江日报;2000年
5 记者 王春 特约通讯员 李佳 首席 曹谊林;组织工程:再造完美血肉之躯[N];科技日报;2005年
6 丁香;成人干细胞的突破——首次组织工程气管移植成功[N];中国医药报;2008年
7 记者 林洵 通讯员 王继荣 罗国金;组织工程关键技术研发项目启动[N];健康报;2012年
8 ;苏州组织工程政采代理机构培训[N];政府采购信息报;2007年
9 记者 张楠 通讯员 曾光强;石墨烯三维神经支架材料研发成功[N];中国科学报;2013年
10 陈丹;美在实验室中培养出组织工程骨骼肌[N];科技日报;2014年
11 项铮 曙光 编译;组织工程:从科研到产业[N];科技日报;2001年
12 吴一福;四军医大制备成功仿生神经新型支架材料[N];中国医药报;2006年
13 张建松;上海着手开展人体组织工程的临床探索[N];中国高新技术产业导报;2001年
14 本报记者 王春 特约通讯员 李佳;探访组织工程“梦工厂”[N];科技日报;2005年
15 张建松;上海开展人体组织工程临床探索[N];中国医药报;2001年
16 记者 甘晓;首例再生支架材料修复手术完成[N];中国科学报;2015年
17 本报记者 沈英甲;组织工程:新的医学奇迹[N];科技日报;2001年
18 记者 白毅;同济大学骨组织支架材料相关研究通过鉴定[N];中国医药报;2006年
19 本报记者 汪敏华;组织工程:再造器官可能圆梦[N];解放日报;2001年
20 记者 范跃红;浙江组织工程人员上警示教育课[N];检察日报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978