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施今墨对药配方对T2DM大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响

王雪楠  
【摘要】:目的通过施今墨对药配方对T2DM大鼠药物干预,观察其对模型鼠血糖、葡萄糖曲线下面积(AUC)、C-反应蛋白、游离脂肪酸(NEFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及骨骼肌组织中PI3Kp85α、GLUT4蛋白和糖原含量的影响,探讨对T2DM大鼠骨骼肌IR的作用机制。方法50只SPF级实验用Wistar大鼠(雄性),普通饲料+纯水饲养一周,以使其适应新的生存环境。随机选取6只标记为正常组(Normal),单独分笼,继续如前饲养。余44只进行高脂饲料+5%糖水饲养,4周后以35mg/kg剂量对44只大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ),诱导T2MD大鼠模型,以空腹血糖(FBG)≥11.1mmol/L、餐后血糖(PBG)≥16.7mmol/L为成模标准,除去死亡和未达标,共30只大鼠成模。将30只成模大鼠按随机数字表法分为二甲双胍组(Metformin)6只,T2DM大鼠模型组(Model)6只,施今墨对药配方高剂量组(SJMH)6只,施今墨对药配方中剂量组(SJMM)6只,施今墨对药配方低剂量组(SJML)6只,依次灌胃二甲双胍混悬液(0.1g/kg)、施今墨对药配方高剂量浓缩药液(23.2g/kg原生药量)、施今墨对药配方中剂量浓缩药液(11.6g/kg原生药量)、施今墨对药配方低剂量浓缩药液(5.8g/kg原生药量)。未注射STZ的正常组6只大鼠灌胃生理盐水,作为空白对照组。每天8:00am灌胃一次,每周称重并记录,持续8周,并于给药0、4、8周时进行口服糖耐量试验(OGTT),并计算葡萄糖曲线下面积(AUC),动态观察大鼠状态。实验结束时,腹主动脉取血,3000r/min离心15min后存取上清,取后腿骨骼肌组织,-80℃冻存。ELISA法测定血清C-肽(C-P)和C-反应蛋白(CRP),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。参照试剂盒测定血清中游离脂肪酸(NEFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和骨骼肌糖原。免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测骨骼肌中PI3Kp85α、GLUT4蛋白表达。结果1药物干预8周后,正常组大鼠精神活跃,体重呈增长趋势,毛色白而光润;模型组大鼠行动变缓,体重降低,出现毛色枯黄及脱毛;同模型组比,二甲双胍组、SJMH、SHMM和SJML大鼠体重下降幅度较缓,尤以SJML和二甲双胍组差异显著(P0.05)。2对FBG、PG2h和AUC的影响:实验结束时,同模型组比,SJMM、SJML与二甲双胍组的FBG、PG2h、AUC明显降低(P0.05),SJMH的PG2h、AUC有所下降(P0.05)但FBG改善情况不明显(P0.05),SJML改善AUC的效果与二甲双胍组无差异(P0.05)。3对C-P和HOMA-IR的影响:给药8周后,同正常组比,模型组T2DM大鼠的C-P下降,HOMA-IR升高(P0.05);同模型组T2DM大鼠比,SJMH、SJMM、SJML和二甲双胍组的C-P升高(P0.05),HOMA-IR降低,其中SJML和二甲双胍组更显著(P0.05)。4对NEFA、氧化应激指标与CRP的影响:给药8周后采集标本,同正常组比:模型组6只T2DM大鼠的NEFA、MDA、CRP升高(P0.05),SOD下降(P0.05);SJMH、SJMM、SJML、二甲双胍组的SOD与正常组无差异(P0.05),但MDA、NEFA、CRP升高(P0.05)。同模型组比:SJMM、SJML和二甲双胍组NEFA、CRP明显下降(P0.05),其中SJMH、SJMM、SJML降低CRP的效果与二甲双胍组无差异(P0.05);SJMH、SJMM、SJML和二甲双胍组的SOD显著升高(P0.05)而MDA明显下降(P0.05)。5对骨骼肌PI3Kp85α、GLUT4蛋白和肌糖原的影响:同正常组比,注射STZ的30只T2DM大鼠肌糖原含量降低(P0.05)而T2DM大鼠模型组、SJMH的PI3Kp85α、GLUT4表达下调(P0.05),SJML的PI3Kp85α蛋白水平也出现下调(P0.05)。同T2DM大鼠模型组比,二甲双胍组、SJMH、SJMM和SJML的PI3Kp85α、GLUT4蛋白表达和肌糖原含量上调(P0.05)。其中SJMM、SJML与二甲双胍组的GLUT4表达水平无差异(P0.05),SJMM与二甲双胍组的PI3Kp85α蛋白水平无差异(P0.05)。结论1施今墨对药配方能延缓T2DM大鼠体重下降,降低血糖水平,减轻T2DM大鼠胰岛功能损伤,改善糖耐量及IR。2施今墨对药配方能降低T2DM大鼠游离脂肪酸水平、减小氧化应激和炎症损伤,提高骨骼肌糖原含量,改善T2DM大鼠骨骼肌IR。3施今墨对药配方改善T2DM大鼠骨骼肌IR的机制可能为通过上调骨骼肌组织中PI3Kp85α、GLUT4蛋白水平实现。图6幅;表3个;参138篇。


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