收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪β-防御素-1的原核表达及其抗微生物活性

袁洪兴  
【摘要】:防御素(Defensin)是一类广泛分布于动物和植物界,富含精氨酸和半胱氨酸残基的阳离子内源性抗微生物肽,具有广泛的生物学活性,可抗细菌、囊膜病毒等多种病原微生物,并且具有不诱导细菌产生耐药性的特性。此外,防御素还具有免疫调节功能。因此,防御素被认为是一种新型抗生素,作为抗感染制剂具有广阔的应用前景。本论文首先构建了猪β-防御素-1(Porcineβ-defensin-1, PBD-1)原核表达质粒,表达了重组PBD-1,然后通过体内外试验检测了重组PBD-1的抗微生物活性,旨在为进一步研发新型治疗制剂奠定基础。 应用RT-PCR获得了长为247bp的PBD-1全基因序列,首先构建了重组克隆载体pGM-T-PBD-1,进而构建了表达PBD-1成熟肽的重组表达载体PET-32a-PBD-1。然后在大肠杆菌BL21细胞中成功表达了24.5kDa的重组PBD-1。利用6×His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组PBD-1,获得了纯化的重组PBD-1。 体外试验证明重组PBD-1对大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌和巴氏杆菌均具有不同程度的抗菌活性,随着重组PBD-1浓度的升高,抗菌活性随之增强。重组PBD-1在体外分别与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(H9N2)作用1h后,可以抑制病毒在相应细胞上增殖,阻止细胞病变的出现;当PEDV和AIV分别感染细胞1h后,重组PBD-1对PEDV的致细胞病变效应抑制效果不明显,但可抑制AIV的致细胞病变效应。 对人工感染大肠杆菌病雏鸡的治疗试验表明,重组PBD-1可明显降低雏鸡发病率、死亡率及肉眼病理变化程度,其治疗效果与头孢曲松钠的治疗效果无显著差异;当重组PBD-1与头孢曲松钠联合应用时的疗效更佳。感染后1周重组PBD-1治疗组与联合治疗组的平均体重显著高于非治疗感染组的体重(P<0.05),而头孢曲松钠治疗组与感染非治疗组的平均体重差异不显著(P>0.05)。 综合上述研究结果表明,本研究表达的重组PBD-1,具有广泛的抗微生物活性,但针对不同的细菌或病毒抑制效果存在差异。重组PBD-1对大肠杆菌实验感染病鸡有明显的治疗效果,当其与抗生素联合应用时疗效更佳。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张辉华,曹永长,毕英佐;鸡β-防御素cDNA的克隆与序列分析[J];中国预防兽医学报;2004年03期
2 吴萨日娜;赵艳芳;余兴帮;都格尔斯仁;杨银凤;;驯鹿β-防御素-1(reBD-1)mRNA在驯鹿组织器官中的表达检测[J];中国草食动物;2006年06期
3 杨银凤,唐博,余兴邦,曹贵方;β-防御素caBD-1 mRNA在骆驼组织器官中的表达[J];中国兽医科技;2004年11期
4 石建州;康相涛;孙桂荣;田亚东;齐珂珂;;鸡β-防御素及其基因工程研究进展[J];江西师范大学学报(自然科学版);2007年01期
5 杨银凤;余兴邦;唐博;曹贵方;范光丽;;骆驼β-防御素-1(caBD-1)基因在组织中的表达定位检测[J];畜牧兽医学报;2005年12期
6 闫海龙;高晔;庞全海;屈雷;杨银凤;;佳米驴β-防御素aBD-1组织表达[J];中国草食动物;2010年04期
7 张伟;朱连勤;赵风立;龙芳羽;;β-防御素研究进展[J];动物医学进展;2006年05期
8 杨银凤;赵艳芳;余兴帮;郝永峰;;驯鹿β-防御素reBD-1 cDNA的克隆及序列分析[J];畜牧兽医学报;2006年08期
9 刘双龙;王长法;杨宏军;杨少华;阿合买提·买买提;高运东;仲跻峰;;荷斯坦奶牛中性粒细胞β-防御素cDNA的克隆与序列分析[J];动物学杂志;2007年05期
10 李咏兰;邵艳红;邱广亮;王秀梅;曹贵方;;蒙古绵羊β-防御素的纯化及其抗菌活性研究[J];中国兽医杂志;2008年02期
11 孙洁;祁克宗;李娜;刘红梅;高恒;;鸡肝脏组织中防御素基因片段的克隆[J];饲料工业;2007年05期
12 杨银凤;赵艳芳;都格尔斯仁;吴萨日娜;;驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因在组织中表达的原位杂交检测[J];中国预防兽医学报;2007年09期
13 邵艳红;李咏兰;曹贵方;王秀梅;李淑凤;;原位杂交技术检测蒙古绵羊胎儿β-防御素的表达[J];中国畜牧兽医;2008年09期
14 杜沂平;;鸡β-防御素及其真核表达载体构建分析[J];中国畜禽种业;2011年02期
15 吴金梅,王艳玲,陈丽颖;禽类抗菌肽的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2005年05期
16 杨江涛;佟建明;刘晴雪;;苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7β-防御素基因表达的影响[J];中国饲料;2008年12期
17 袁雪波;郭荣富;陈恒灿;;β-防御素的研究进展及其应用前景[J];兽药与饲料添加剂;2009年02期
18 孙岩;王路;温俊歌;薄联锋;徐志坤;张德礼;;β-防御素在天然免疫中的作用[J];动物医学进展;2011年05期
19 郝永峰;杨银凤;赵艳芳;余兴帮;都格尔斯仁1;;驯鹿β-防御素-1 cDNA3′末端的克隆及序列分析[J];中国兽医科学;2006年03期
20 刘双龙;王长法;杨宏军;杨少华;阿合买提·买买提;高运东;仲跻峰;;荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素基因克隆及其原核表达质粒的构建[J];畜牧与兽医;2007年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孟丽丽;钟凯;王月影;杨国宇;王林枫;韩立强;;断乳对小鼠乳腺β-防御素1基因表达的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
2 李子瑞;邵昱昊;韩宗玺;刘晓丽;刘胜旺;马得莹;;鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
3 周财源;蔺丽娟;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;马得莹;;一个新的禽β-防御素,鹅β-防御素5基因克隆与生物学特性的初步分析[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 蔺丽娟;王瑞琴;周财源;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;马得莹;;鹌鹑β-防御素10基因的克隆及其生物学作用的初步研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
5 陈金永;余冰;黄志清;陈代文;;维生素A调节猪体内β-防御素基因表达的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
6 孟丽丽;钟凯;王月影;杨国宇;王林枫;韩立强;;妊娠和泌乳期小鼠乳腺β-防御素1基因的差异表达[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
7 王瑞琴;蔺丽娟;周财源;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;马得莹;;鹌鹑β-防御素9重组蛋白的原核表达及其生物学特性的初步研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
8 刘胜敏;刘桂琼;胡杰;姜勋平;;山羊β-防御素基因(GBD-1)组织表达谱研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
9 杨江涛;佟建明;刘晴雪;;苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7β-防御素基因表达的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
10 杨江涛;董晓芳;佟建明;刘晴雪;张琪;吴莹莹;;苜草素多糖、黄酮和皂苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7β-防御素基因表达的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵鹏伟;蒙古绵羊β-防御素-1的表达、纯化及生物学功能研究[D];内蒙古农业大学;2011年
2 胡琼洁;β-防御素-2,AHL内酯酶对肺部铜绿假单胞菌感染的干预研究[D];华中科技大学;2010年
3 程兰玲;荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞β-防御素mRNA的表达及可能信号通路的初步研究[D];内蒙古农业大学;2012年
4 杨银凤;骆驼β-防御素-1(caBD-1)的分子克隆和组织表达[D];西北农林科技大学;2004年
5 董开忠;牦牛中性粒细胞抗菌肽分离纯化、LAP基因克隆及原核表达[D];甘肃农业大学;2008年
6 李冬青;表皮葡萄球菌脂肽抑制伤口病原微生物感染和调节炎症应答的分子免疫学机制[D];华东师范大学;2013年
7 李思明;维生素D_3对丝毛鸡β-防御素诱导表达及生长免疫性能的影响[D];四川农业大学;2009年
8 唐博;蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素(sBD-1)表达的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
9 王成硕;Toll样受体和β-防御素mRNA在鼻粘膜中的表达[D];吉林大学;2004年
10 包图雅;17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素基因表达的影响及可能的信号通路[D];内蒙古农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 袁洪兴;猪β-防御素-1的原核表达及其抗微生物活性[D];河北农业大学;2013年
2 辛胜男;2个新的鸽β-防御素5的克隆与生物学特性的初步研究[D];东北农业大学;2013年
3 郑龙鹏;小鼠β-防御素-9的原核表达及其多克隆抗体的制备[D];南京农业大学;2009年
4 张名岳;三个新的鹅β-防御素的分离、鉴定及其抗菌机制的初探[D];东北农业大学;2012年
5 符梅;牦牛β-防御素5基因的原核表达及乳腺特异性表达载体的构建[D];西南民族大学;2013年
6 邵长胜;三个品种猪肠道β-防御素表达与特性分析[D];安徽农业大学;2013年
7 张佩华;婴儿体外循环围术期β-防御素2水平变化的研究[D];浙江大学;2010年
8 张可心;五个新的鸭β-防御素的分离、鉴定及其抗病毒机制的初探[D];东北农业大学;2012年
9 李爱娟;大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测[D];兰州大学;2010年
10 孟丽丽;β-防御素1基因在小鼠乳腺组织中表达的研究[D];河南农业大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;我学者首次发现抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系[N];中国医药报;2006年
2 宋冬 何玉玺;祖国的需要,就是我们最好的选择[N];科技日报;2009年
3 记者 张颖 伊洁;农林大学学生喜获“挑战杯”特等奖[N];福建日报;2005年
4 本报记者 伊洁 张颖;“挑战杯”的胜利者[N];福建日报;2005年
5 俞忠良;我国克隆出SARS病毒样颗粒[N];健康报;2003年
6 庄苏 李忠平 李杰;强普素对肉鸡生产性能的影响[N];中国畜牧兽医报;2007年
7 张晓鹏 何秀丽;哈兽研构建起“猪蓝耳病”预防控制平台[N];中国畜牧兽医报;2008年
8 张国民;还大家一个明白[N];中国医药报;2003年
9 范晓艳;巨资打造抗HIV新药[N];医药经济报;2003年
10 顾良军 徐允盛;序贯疗法 优化抗生素治疗[N];医药经济报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978