收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鸭细小病毒SD株分离与鉴定及基因组特征分析

崔元  
【摘要】:“鸭短喙-侏儒综合征”(Beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是一种以雏鸭发育不良、喙萎缩变形、舌外伸肿胀和骨质疏松为主要特征的传染病。自2014年11月以来,该病在我国东南多省的商品肉鸭群中发生并流行,给我国鸭养殖业造成了严重的经济损失。本研究旨在从流行病学与病原学角度出发,分离相关病原进行致病性分析,明确引发BADS的病因,并建立病原实验室检测方法,探究致病病原的相关特性,为该病的防控提供理论依据及技术支持。本文主要从以下三个方面进行论述:首先,为了探究BADS的致病原因,本研究对发生BADS病鸭的肝脏和脾脏进行了PCR/RT-PCR检测,排除了其他的鸭常见疫病,将该病的病原命名为鸭细小病毒(Duck parvovirus,DPV)。将阳性病料研磨液接种鸭胚,盲传5代,收获尿囊液,通过PCR检测、测序鉴定、同源进化分析、动物回归试验,最终确定本研究成功分离到了一株DPV(命名为DPV SD)。此外,本研究还利用鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblasts,DEF)对病毒进行了分离培养,PCR和间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)结果表明,本研究成功获得了SD株的细胞分离毒。DPV SD株的成功分离为DPV的进一步研究打下了基础。其次,为了进一步探究DPV分子水平上的特性,本研究对SD株的全基因组序列进行了分段扩增,并对其基因序列进行了结构特征分析及同源进化分析。结果表明,SD株全长5053 bp,由两端的末端倒置重复序列(Inverted terminal repeat,ITR)和中间的开放阅读框(Open reading frame,ORF)组成。左侧ORF(LORF)编码非结构蛋白NS,右侧ORF(RORF)编码结构蛋白VP。SD株与其他BADS分离株和鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)欧洲分离株的亲缘关系较近,而与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)分离株的关系较远。此外,与绝大多数水禽细小病毒相比,SD株的ITR区分别于100~114 nt和337~350 nt的区域存在14个碱基的缺失。最后,潜在糖基化位点的预测分析结果表明,SD株NS和VP蛋白上共有6个潜在糖基化位点。本研究为DPV的分子致病机制及分子流行病学调查的深入研究奠定了基础。最后,本研究通过PCR扩增了SD株的VP3基因,构建了标准品重组质粒pMD19-SD-VP3。选取VP3基因中在各株DPV之间较为保守且和其他水禽细小病毒有差异的区域,设计了1对荧光定量PCR引物及1条荧光探针。经过对反应体系的优化和标准曲线的绘制,最终建立了针对DPV的荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和可重复性进行了验证。结果表明,建立的DPV Taq-Man实时荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、可重复性良好。此检测方法的建立为DPV的实验室诊断提供了有力的技术支持。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 邓喜平;;犬类细小病毒的诊断与防治要点[J];农民致富之友;2018年03期
2 郑肖强;陈浩;窦砚国;杨晶;牛晓宇;于相龙;刁有祥;;鸭细小病毒地高辛标记探针的制备与应用[J];中国兽医学报;2016年12期
3 赵学思;;随诊细小病毒一例[J];中国动物保健;2017年04期
4 靳小霞;孙兆增;曾林;王化磊;王铁成;杨松涛;夏咸柱;;猴源细小病毒血凝和血凝抑制试验的优化与应用[J];中国实验动物学报;2011年06期
5 饶家辉;王玉平;雷连成;;猫细小病毒、犬细小病毒、貂细小病毒的特征比较[J];中国畜牧兽医;2009年07期
6 芦映红;贵琳;;79例儿童细小病毒B_(19)感染的临床分析[J];中国小儿血液;2005年06期
7 吕兴,蔡定邦,梁星群,严越秀,李晖,陈享;人类细小病毒B_(19)感染与新生儿高间接胆红素血症[J];小儿急救医学;2003年01期
8 杨敏 ,雷尚兵 ,柯辉 ,王晓勋;16例中性粒细胞减少症患儿血清细小病毒B19检测结果分析[J];临床儿科杂志;2002年02期
9 保映祥;犬、猫细小病毒的诊治[J];云南畜牧兽医;2001年01期
10 Tanawattanacharoen S,余英豪,武一曼;局灶节段肾小球硬化患者肾组织细小病毒19DNA的检测[J];医学信息;2001年06期
11 张宝荣,王琦,贾万英,李静岩,杨洪江;伴细小病毒B_(19)感染的小儿特发性血小板减少性紫癜治疗的临床研究[J];中华血液学杂志;1999年09期
12 罗祖玉,林万敏,郭兰萍,黄青山;肿瘤靶向性载体的研究与利用──自主性细小病毒趋瘤性的开发[J];生命科学;1999年02期
13 张英;细小病毒的分子生物学[J];中国病毒学;1996年03期
14 J.B.McFerran;张立波;;细小病毒研究的新进展[J];国外畜牧科技;1991年02期
15 卢建国;J.B.McFerran;S.McNulty;;雏鸡贫血因子和细小病毒[J];国外畜牧学(猪与禽);1991年02期
16 Rommelaere J ,庄昀红;细小病毒的抗肿瘤活性[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1992年06期
17 苏兆众;罗祖玉;;哺乳动物及人自主性细小病毒研究概况[J];国外医学(微生物学分册);1987年03期
18 苏兆众,罗祖玉,郭兰萍;细小病毒和肿瘤[J];肿瘤;1987年06期
19 L. E. Carmicheal;洪雷译;;犬类新的肠道病毒(续一)[J];上海实验动物科学;1987年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨松涛;王淑君;冯浩;张仁舟;曾林;夏志平;邹啸环;王承宇;连海;孙兆增;孟轲音;王泽;夏咸柱;;猴源细小病毒的分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集(1)[C];2009年
2 杨松涛;乔军;谢之景;赵忠鹏;戈锐;王铁成;冯娜;夏咸柱;;肉食兽细小病毒研究概述[A];全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C];2006年
3 王蓉;宋娜;孙红;;武汉住院患儿细小病毒B19的感染状况分析[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年
4 程晓霞;朱小丽;林锋强;王劭;陈仕龙;肖世峰;陈少莺;俞伏松;;三种鸭源细小病毒的抗原相关性研究[A];福建省畜牧兽医学会2017年学术年会论文集[C];2017年
5 卢悦;王贵升;田夫林;;水貂细小病毒检测技术研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年
6 闫喜军;张海玲;陈涛;柴秀丽;赵建军;罗国良;吴威;王凤雪;邵西群;;水貂肠炎细小病毒分子流行病学研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
7 万春和;傅秋玲;陈翠腾;傅光华;陈红梅;程龙飞;施少华;黄瑜;;新型鸭细小病毒全基因组克隆[A];福建省畜牧兽医学会2016年学术年会论文集[C];2016年
8 奉彬;谢芝勋;张艳芳;黄娇玲;王盛;范晴;黄莉;谢丽基;曾婷婷;罗思思;邓显文;谢志勤;刘加波;;鸡细小病毒半巢式PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集[C];2017年
9 谢丽基;谢芝勋;邓显文;谢志勤;庞耀珊;范晴;刘加波;;鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2012年
10 孟藏龙;孟祥玉;盛程程;许皓;石坤;陈立志;;细小病毒引起水貂死亡病例的诊断[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集[C];2016年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 布日额;GPV VP及NS基因克隆及其原核表达产物的研究和应用[D];东北农业大学;2005年
2 王建科;肉食动物细小病毒流行株分子特征与致病性分析[D];中国农业科学院;2016年
3 冯昊;狂犬病病毒、细小病毒病毒样粒子及嵌合细小病毒样粒子的构建、鉴定与实验免疫研究[D];吉林大学;2011年
4 毛亚萍;水貂肠炎细小病毒致病株的分离及VP2蛋白部分关键氨基酸位点的功能研究[D];中国农业大学;2016年
5 李雪梅;鹅细小病毒和番鸭细小病毒部分基因组克隆、序列分析及VP2-VP3基因的表达[D];中国人民解放军军需大学;2001年
6 关晶;重型再生障碍性贫血患者免疫功能的研究[D];天津医科大学;2015年
7 赵林清;新发现的人类Boca病毒与儿科呼吸道感染相关性的初步研究[D];中国协和医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 崔元;鸭细小病毒SD株分离与鉴定及基因组特征分析[D];河北农业大学;2018年
2 李晓轩;鸭细小病毒病灭活疫苗的研制[D];河北农业大学;2018年
3 孙亚茹;不同抗原型犬细小病毒及其与猫细小病毒分子鉴别方法的建立及初步应用[D];中国农业科学院;2018年
4 李琦;新型鸭细小病毒DS15株的分离鉴定及VP2蛋白在昆虫细胞中的表达[D];甘肃农业大学;2017年
5 靳小霞;猴源细小病毒的人工感染及免疫预防研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
6 李亚莎;人血样中细小病毒的检测与分析:肿瘤患者人群具有高感染率[D];华中师范大学;2011年
7 雍海平;猫细小病毒间接ELISA方法的建立及灭活疫苗毒株筛选[D];吉林大学;2008年
8 李晓刚;家蚕对细小病毒样病毒(中国株)非敏感性因子的初步研究[D];江苏大学;2010年
9 吕萌;家蚕细小病毒样病毒(中国镇江株)结构蛋白的鉴定与解析[D];江苏大学;2010年
10 丁毅;猫细小病毒灭活疫苗的制备及保护性研究[D];吉林大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 丰润县畜牧水产局(064000)王庆泽;中药治疗犬细小病毒性肠炎好[N];河北科技报(农村版);2000年
2 贾克勇 李云;大量买狗注意要点[N];中国畜牧水产报;2000年
3 冯国民;种猪淘汰有讲究[N];中国畜牧兽医报;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978