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河北地区Rh弱D表型分布与基因分型研究

王远花  
【摘要】:目的:Rh血型系统是最复杂的红细胞血型系统,在临床输血中的重要性仅次于ABO血型系统。目前已经确定的Rh系统抗原多达40多个。位于人类染色体1p34.3-36.1的RHD基因和RHCE基因分别编码Rh血型系统的抗原Rh D和Rh C/c、Rh E/e,其中D抗原在输血医学和产科学中的意义最为显著。一般称D抗原阴性的为Rh阴性血型,D抗原阳性的为Rh阳性血型。弱D表型是指D抗原表位都存在,抗原表位无质量变化,仅仅是抗原表位数量减少,这种只是由于数量变化而导致的弱反应性D抗原,统称为弱D。有关弱D表型的分布与基因分型研究结果各地并不一致,且大部分报道集中在中国台湾人群,国内只有南方地区弱D表型的分布与基因分型研究。对于河北地区人群中Rh弱D的分布及其分子背景的研究尚不全面,因此本研究对河北人群弱D表型做了血清学鉴定,并用序列分析方法对其分子机理进行了研究。Rh血型系统中最重要的抗原有5种,分别是:C、c、D、E、e抗原。其中以D抗原的免疫原性最为强烈。D抗原表达弱的红细胞可能刺激D阴性受血者产生抗体,临床上确实见到过受血者被弱D抗原致敏,发生溶血性反应的病例,这已经引起临床医护工作者与科研人员的重视。美国输血协会血库和输血机构标准要求对献血者的标本检验是否是弱D表型,对受血者血清中已有抗-D时,切不可输用弱D型红细胞,因该受血者血清抗-D会极快地破坏输入的弱D型红细胞,因此,揭示弱D表型的遗传背景及基因多态性,设计相应的PCR试验准确而高效地检测弱D表型,是提高临床输血安全性的重要手段。本研究将对河北地区随机抽取的Rh阴性献血者血样进行血清学筛选,分析筛选出的弱D表型的分子遗传学背景。实验均在河北省血液中心配型实验室进行,通过本项目中的血清学筛选,我们可以了解河北地区Rh阴性献血者中弱D的分布比例,通过分子背景的研究,我们能够发现弱D的遗传多态性,希望能发现新的等位基因则更有意义。通过该项目的研究,将弱D的基因检测作为今后河北地区弱D表型基因分型的鉴定方法,以便于将来根据弱D抗原的分子基础,更合理有效安全的使用弱D血液。方法:1用标准血型血清学方法对78000名河北省血液中心的献血者进行Rh D抗原鉴定,对初筛为Rh阴性结果的,再用三种不同来源的抗D血清以抗人球蛋白方法进行Rh D抗原确定。2制备基因组DNA及Rh表现型采用微柱法从214例Rh阴性献血者全血中提取高纯度基因组DNA。并对其进行DNA浓度以及纯度的检测。3序列特异性引物PCR(sequence specific primers,PCR-SSP),以HGH(human growth hormone,HGH)为内对照,对RHD基因第3、4、5、6、7、9特异性外显子进行等位基因特异性PCR扩增。将PCR产物行2.5%琼脂糖凝胶电泳后,根据PCR产物的有无以及片段的长短,判定是否存在RHD基因表位的缺失。4基因检测采用天津市秀鹏生物技术开发有限公司研制的《人类红细胞RHD血型弱D、部分D基因检测试剂盒》对表位缺失样本进行分析。结果:1血型血清学实验在78000名河北省血液中心的献血者样本中经血型血清学方法鉴定Rh阴性的人为214例,占正常人群的比例为0.275%,35人为Rh弱D型,占正常人群的比例为0.045%。2对214例Rh阴性个体做血型血清学分型,全小因子ccee表型为88例,Ccee表型67例,cc Ee表型24例,Cc Ee表型15例,CCee表型12例,cc EE表型8例。3 PCR-SSP扩增结果显示河北汉族群体Rh D阴性基因外显子存在着明显的多态性。在35例弱D样本中,30例Rh D基因外显子完整,5例样本Rh D基因外显子部分缺失。4在30例Rh D基因外显子完整的样本中检出27例弱D15型、3例弱D24型;5例部分D缺失中,检出3例为RHD基因2-9外显子融合,表示为RHD-CE(2-9)-D;1例样本检测为D Cat.Va type2;1例样本为D Cat.VI type2。结论:1在河北地区78000献血员人群中,常规血型血清学鉴定的Rh D阴性者为214例,占正常人群的比例为0.275%,其中检出35例弱D型,占正常人群的比例为0.045%。2 214例Rh阴性样本的Rh表现型全小因子ccee表型88例,Ccee表型67例,cc Ee表型24例,Cc Ee表型15例,CCee表型12例,cc EE表型8例。3 35例弱D型中检出30例Rh D基因外显子完整,其中27例弱D15型、3例弱D24型;5例样本Rh D基因外显子部分缺失,其中3例为RHD基因2-9外显子融合,表示为RHD-CE(2-9)-D;1例样本检测为D Cat.Va type2;1例样本为D Cat.VI type2。4在河北地区,常规鉴定的Rh D阴性的弱D型检出率为16.4%,其中主要是弱D15型,其占弱D型的77.1%。


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