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姜黄素对食管癌细胞Eca-109增殖及Wnt信号通路影响的研究

陈剑华  
【摘要】:目的:研究中药姜黄素体外对食管癌细胞Eca-109增殖、细胞周期、凋亡以及对Wnt信号通路相关基因表达的影响,为姜黄素的进一步开发提供科学依据。方法:1采用MTS法分析不同浓度(10、20、40μmol/L)姜黄素干预不同时间后,对Eca-109细胞增殖的抑制作用。2应用流式细胞术检测经不同浓度(10、20、40μmol/L)姜黄素作用24h、48h、72h后,Eca-109细胞的周期分布和凋亡率。应用Q-PCR和western-blot方法检测周期蛋白Cyclin B1基因和蛋白的表达水平。3用Q-PCR法和western-blot方法检测经不同浓度(10、20、40μmol/L)姜黄素作用48h后,Eca-109细胞Wnt信号通路中β-catenin、关键酶GSK-3β、下游因子c-myc m RNA和蛋白表达的变化。结果:1 MTS试验结果显示,经不同浓度(10、20、40μmol/L)姜黄素干预24、48、72h后,对Eca-109细胞增殖抑制率呈上升趋势。姜黄素浓度越大,对细胞增殖抑制作用越明显,并呈时间、剂量依赖性(P0.05)。2流式细胞术测细胞结果显示,经不同浓度(10、20、40μmol/L)姜黄素干预48小时后,Eca-109细胞周期和细胞凋亡率发生明显变化,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.01),G2/M期细胞比例明显增高(P0.01);细胞凋亡率明显增加(P0.01),姜黄素浓度越高,差异越明显。Q-PCR和Western-blot检测结果显示,经姜黄素处理后,Cyclin B1m RNA和蛋白表达水平降低(P0.05)。3 Q-PCR和western-blot检测结果显示,姜黄素干预后,与对照组细胞相比,Eca-109细胞β-catenin、c-myc m RNA和蛋白表达水平降低,有显著性差异(P0.01),GSK-3?m RNA和蛋白表达水平明显上调,有显著性差异(P0.01)。结论:姜黄素能使Eca-109细胞发生G2/M期阻滞,抑制Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡。姜黄素可通过上调细胞关键酶GSK-3?表达量,减少β-catenin的表达,阻断信号传导通路,抑制下游靶基因c-myc的表达,进而抑制增殖,诱导细胞凋亡。


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