收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

新型隐球菌FQ-PCR检测体系在血流感染动物模型的应用研究

尤校雷  
【摘要】:目的:建立新型隐球菌血流感染动物模型,收集动物血浆和肺泡灌洗液标本,同时进行FQ-PCR、培养、墨汁染色、组织病理、乳胶凝集实验对照观察,探讨FQ-PCR检测体系在动物模型标本中DNA的诊断价值及与所选的四种比较方法的优选性,奠定临床真菌PCR检测试剂盒开发的基础,以实现真菌感染的早期临床诊治,降低临床真菌感染的病死率及治疗成本。方法:1实验研究方案:(1)标准株培养及制备,标准新型隐球菌接种于PDA平板37℃培养48小时后,用接种环刮取菌落溶于生理盐水放入已消毒的EP管中;通过血细胞计数板计数,制成细胞浓度约为106CFU/ml的混悬液,作为标准株储存液,置于-80℃冰箱备用。(2)动物模型,32只雄性SD大鼠,采用随机分配原则分为4组,同时称重,编号,分别笼养,按时提供食物和水。A组:免疫抑制感染组(n=10只):注射环磷酰胺(150mg/kg)溶液进行免疫抑制大鼠,尾静脉注射新型隐球菌菌悬液感染动物;B组:正常状态感染组(n=10),注射等量的生理盐水,模型建立后尾静脉注射新型隐球菌菌悬液感染动物C组:正常对照组(n=6):正常饲养;D组免疫抑制对照组(n=6);仅注射环磷酰胺(150mg/kg)溶液进行免疫抑制大鼠。A+B为实验组(感染后第3天全部处死),C+D为对照组(感染后第3天全部处死)。2统计学方法:全文在数据处理和分析中均采用SPSS20.0统计软件进行统计学处理,将采集的实验组和对照组动物的血清和支气管肺泡灌洗液标本FQ-PCR检测后结果进行比较。实验组不同天数与对照组先进行总体的χ2检验,当P0.05,实验组与对照组差异有统计学意义。各实验组不同时间点与同一对照组进行两两比较,检验水准要调整为a--0.05/2(5.1),即当P0.00625时,差异有统计学意义。结果:1免疫抑制感染组感染后24小时出现开始出现食欲差,活动减少,被毛失去光泽,鼠毛蓬乱,前足抱头身体呈弓形逐;正常状态感染组仅见3例食欲减低,活动少,对照组一般情况良好;2感染后第3天处死大鼠,取肺组织和其它脏器(肝、脾、脑)。实验组与正常对照组大鼠比较,肺组织密布隆起灰白色结节,脾稍大,其他脏器未见异常;3将正常鼠的血浆101CFU/ml混悬液进行1:1、1:2、1:3、1:4稀释,热带念珠菌标准株102CFU/ml混悬液进行1:1、1:2、1:3、1:4稀释,提取DNA后进行PCR扩增,重复8次。新型隐球菌标准株混悬液经1:1稀释后能完全扩增,而经1:2、1:3、1:4稀释后样本未见扩增或仅部分扩增,该四种反应体系能检测的灵敏度均可以达到105CFU/ml;4将收集的血清及肺组织提取DNA进行FQ-PCR检测,实验组阳性率较正常对照组和免疫对照组高,P0.05,差异有统计学意义,随感染时问延长,阳性率逐渐上升,感染后8小时之前实验组FQ-PCR结果与免疫抑制和正常对照组差异均无显差异;5在FQ-PCR与血培养、荚膜抗原检测、墨汁染色四种对新型隐球菌检测的敏感性比较中,FQ-PCR验敏感性最高,其敏感性为100%,而荚膜抗原达96.2%,血培养敏感性最低,为58.8%,FQ-PCR技术在诊断新型隐球菌的敏感性方面明显高于血培养、墨汁染色、荚膜抗原实验(χ2=8.694,P=0.031);FQ-PCR技术在诊断新型隐球菌的特异性方面明显高于血培养、墨汁染色、荚膜抗原实验(χ2=12.129,P=0.021);6 101拷贝数/ul是FQ-PCR的最低检测出来的浓度,上述结果表明:通过采用实时荧光的方法利用定量PCR的对FQ-PCR灵敏度进行检测,其灵敏度为101拷贝数/ul;7在六种菌株中,只有新型隐球菌表现出明显的特异性扩增,剩余的五种菌株均没有发现有荧光曲线增长的现象,上述结果进一步说明FQ-PCR检测方法对新型隐球菌的检测具有较好的特异性;8分别将FQ-PCR检测所应用的质粒标准品中的109拷贝数/ul、107拷贝数/ul、105拷贝数/ul三个浓度定义为高、中、低,通过批内重复性检验,可见上述三类的CV值依次为0.59%、0.90%和1.19%,上述结果进一步说明FQ-PCR检测方法在检测新型隐球菌中具有很好的批内重复性。结论:1 FQ-PCR检测技术对于新型隐球菌具有较高的敏感性以及特异性2 FQ-PCR检测方法在检测新型隐球菌中具有很好的批内重复性;3 FQ-PCR检测技术可进行准确的定量检测,用于基因诊断,且定量范围宽,特异性更强,克服了假阳性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 叶程军;郑临;;新型隐球菌性脑膜炎46例诊治分析[J];浙江医学;2007年04期
2 ;病原真菌(霉菌)与放线菌[J];国外科技资料目录.医药卫生;2001年02期
3 田鑫;贺湘玲;刘华;邹润英;邹惠;游亚兰;陈可可;朱呈光;;不同检测方法在血流感染新型隐球菌大鼠中的对比研究[J];中国实验血液学杂志;2018年06期
4 魏亚珍;高旋;;新型隐球菌性脑膜炎9例报告[J];中风与神经疾病杂志;1984年02期
5 周春来,李继梅,王得新,薛启蓂;影响新型隐球菌脑膜炎正确诊断的因素和治疗探讨[J];中风与神经疾病杂志;2004年06期
6 于书春;AIDS患者感染的新型隐球菌血清型别[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1987年05期
7 贾永;;X线与多层螺旋CT诊断新型隐球菌肺炎的价值比较[J];临床医学;2018年04期
8 熊克宫;陈丽芳;柯坤宇;孔金峰;;新型隐球菌性腹膜炎1例[J];实用临床医学;2014年10期
9 常敏;;儿童新型隐球菌肺炎并脑膜炎诊治体会[J];现代中西医结合杂志;2013年11期
10 伍国伟;;肺结核并发新型隐球菌肺炎的CT表现[J];中国防痨杂志;2006年05期
11 黄琪,胡申江;新型隐球菌肺炎1例[J];浙江医学;2004年04期
12 孙恭慧;新型隐球菌性脑膜炎15例误诊原因分析[J];中国综合临床;2003年12期
13 Wieland Meyer ,徐国英;从IberoAmerican分离的新型隐球菌的分子类型[J];中国人兽共患病杂志;2003年05期
14 陈红岩 ,陈梅根;脑脊液中新型隐球菌计数检查在临床的应用(附51例报告)[J];福建医药杂志;2003年05期
15 陈梅根,陈红岩,何爱华;新型隐球菌透射电镜的分型鉴定[J];中国人兽共患病杂志;2002年04期
16 虞建昂;新型隐球菌检验的一种简易试剂[J];江西医学检验;2002年03期
17 王增贵,康晓萍,陶于洪,叶蜀玉;影响新型隐球菌脑膜炎疗效的因素[J];实用儿科临床杂志;2001年06期
18 王国村,任波,李宗祥;静脉注射氟康唑对新型隐球菌致脑膜炎的效果[J];中国医药导刊;2001年05期
19 李莉;;自然环境中新型隐球菌的调查[J];国外医学(微生物学分册);1999年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨辉红;郑霞;聂成刚;徐芳丽;;从血液中检出新型隐球菌一例误诊报告[A];湖北省暨武汉市微生物学会分析微生物专业委员会第十届第五次学术会议论文汇编[C];2008年
2 孙继梅;王艳玲;周秀珍;郑伟;张智洁;刘勇;;新型隐球菌深部感染的临床特点及实验室检测[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
3 柳承福;;新型隐球菌引起脑脊液感染1例报告[A];2007年浙江省医学检验学学术年会论文汇编[C];2007年
4 齐晓涟;张倩;白杨;贾东岗;陆红柳;张运周;;3例新型隐球菌脑膜脑炎联合用药合理性分析[A];第二届全国药物性损害与安全用药学术会议——抗感染药物不良反应与临床安全应用专题研讨会论文汇编[C];2010年
5 沈思钰;;系统性红斑狼疮合并新型隐球菌脑膜脑炎1例报告[A];全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2007年
6 Xu Huan;;Deterministic Lateral Displacement (DLD) based immunocapture microfluidics chip for simple and rapid detection of Cryptococcus neoformans in Cerebral spinal Fluid samples[A];第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2017年
7 ;Identification of a Rossmann Fold-containing Repressor TAR1 Involved in Laccase Repression at Elevated Temperature in the Human Pathogen Cryptococcus neoformans[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
8 杨辉红;郑霞;聂成刚;徐芳丽;;从血液中检出新型隐球菌一例误诊报告[A];中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要[C];2008年
9 徐雪梅;吴思颖;谢轶;陈知行;马莹;何超;康梅;;耐万古霉素肠球菌血流感染的危险因素分析[A];中华医学会第十二次全国临床微生物学术年会暨第十一次全球华人临床微生物学与感染症学术年会论文汇编[C];2015年
10 李晓光;胥婕;;发热门诊血流感染166例临床分析[A];中华医学会第十三次全国感染病学术会议论文汇编[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 孙天舒;新型隐球菌铜离子稳态对感染过程的双向调节作用[D];东北大学;2017年
2 蔡源益;中心静脉导管相关血流感染现状和住院费用负担研究[D];中国医科大学;2018年
3 磨国鑫;鲍氏不动杆菌血流感染的临床病例特点及有关生物信息学特征的初步分析[D];中国人民解放军医学院;2015年
4 赖运成;中学生人际敏感性的结构、特点及其与相关因素的关系[D];福建师范大学;2013年
5 李雄;宫颈癌新辅助化疗敏感性预测因素分析[D];华中科技大学;2015年
6 马征;膜型基质金属蛋白酶-2特异性亲和多肽筛选及在肺癌荧光成像中的应用研究[D];吉林大学;2018年
7 张晓琳;慢性特发性血小板减少性紫癜中诱导血小板特异性T细胞免疫耐受的机制研究[D];山东大学;2007年
8 崔西春;小儿横纹肌肉瘤血清蛋白质标记物的筛选及临床应用研究[D];郑州大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 尤校雷;新型隐球菌FQ-PCR检测体系在血流感染动物模型的应用研究[D];河北医科大学;2016年
2 刘明旭;生物碳点的制备、表征及其初步应用的研究[D];西南大学;2018年
3 陈艳慧;江西省新型隐球菌遗传型、居群遗传变异和药物敏感性的研究[D];南昌大学;2018年
4 索晨浩;新型隐球菌中镁离子转运体的研究[D];东北大学;2016年
5 李焱剑;系统性分析新型隐球菌铜离子稳态对真菌毒性的影响[D];东北大学;2016年
6 缪志侃;血常规相关指标及降钙素原在血流感染中的临床价值研究[D];广西医科大学;2019年
7 韦杰敏;中性粒细胞缺乏急性白血病患者发生细菌性血流感染临床和病原学分析[D];广西医科大学;2019年
8 杨晓梅;某三甲医院ICU成人中央血管导管相关血流感染现状与疾病负担研究[D];山东大学;2019年
9 杨修文;碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌血流感染的临床特征及其预后相关因素研究[D];中国人民解放军医学院;2018年
10 陶然;成人血流感染的回顾性临床研究[D];上海交通大学;2017年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈勇;新型隐球菌基因组图谱绘制成功[N];医药经济报;2005年
2 本报记者 朱国旺;规范血培养 让血流感染治疗不再盲目[N];中国医药报;2009年
3 周宜 湖北省宜城市人民检察院;处理敏感性案件要探寻司法策略[N];检察日报;2015年
4 中科招商投资管理集团董事长兼总裁 单祥双;“企业要有媒体人对信息的敏感性”[N];华夏时报;2013年
5 周奎;对国企敏感性费用监管的思考[N];经理日报;2007年
6 沈律勰;我省加强律师办理群体、敏感性案件指导工作[N];江苏法制报;2007年
7 李震;领导者的人际敏感性[N];组织人事报;2006年
8 晓理;炒股要有敏感性[N];证券时报;2002年
9 记者 朱国旺;相关专家倡导“导管相关性血流感染零容忍”理念[N];中国医药报;2010年
10 遵义市委常委、市委秘书长 宋晓路;增强“服务”敏感性主动性[N];贵州日报;2014年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978