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益气活血中药对大鼠放射性肺损伤的防治实验研究

张晓敏  
【摘要】:研究益气活血中药对大鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内皮素-1(ET-1)、γ-干扰素(γ-IFN)四种因子的影响,免疫组织化学检测TGF-β_1、TNF-α二种蛋白在肺组织中的表达,明确益气活血方药防治放射性肺损伤的作用机制。应用基因芯片技术初步筛选放射性肺损伤发生易感基因,以期阐明放射性肺损伤发病机制。观察益气活血中药对放射性肺损伤相关基因表达的影响,为防治放射性肺损伤的中医药临床应用提供依据。 健康成年Wistar大鼠70只,雌雄各半,分笼饲养。在SPF级实验室正常饲养3天后进行实验。按3:3:1随机分为照射加中药组30只(A组)、单纯照射组30只(B组)、对照组10只(C组)。A、B二组大鼠均采用6MV-X直线加速器照射右肺,照射前使用戊巴比妥钠0.04g.Kg-1腹腔麻醉,俯卧于平台,模拟机下定位,铅块遮挡左肺及纵隔,照射野面积3cm×3cm,每次5Gy,每周一次,总量30Gy,照射后大鼠自然清醒。C组大鼠只进行麻醉,不予照射。于受照当天开始给药,A组每日灌胃益气活血中药1mL,B、C组每日灌胃1mL蒸馏水。A、B二组于首次照射后第4、6、8、12、26周末,各随机抽取6只大鼠,腹腔麻醉后立即处死。C组于第4周末处死6只大鼠、于6、12周末分别处死2只大鼠做对照。大鼠处死后,取血清标本用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,取右肺组织标本进行免疫组织化学检测,取6、12周末右肺组织进行基因芯片检测。检测各组不同时相血清中TGF-β1、TNF-α、ET-1、γ-IFN四种因子的变化,观察肺组织中TGF-β1、TNF-α蛋白表达的动态变化。 1. A、B、C三组血清中TGF-β_1、TNF-α、ET-1因子水平,于照射后第4周升高,第12周达高峰,第26周略下降;A组各时相TGF-β1、TNF-α、ET-1蛋白表达水平均低于B组(P 0.05),而γ-IFN在第4周开始降低,第12周下降加快,至26周逐渐恢复。A组各时相大鼠血清中γ-IFN表达均高于B组(P0.05)。 2.肺组织中TGF-β1、TNF-α蛋白表达强度显示:A组、B组自第4周阳性细胞反应物质的平均IOD值开始增高并高于正常对照组,到第12周达高峰,26周有所下降,但A组在各时间点平均光密度值(IOD)值均低于B组(P0.05)。 3. 6周末B组与C组比较,差异表达基因中筛选出上调基因669个,下调基因381个。12周末处死的B组与C组比较,差异表达基因中筛选出上调基因833个,下调基因1217个。与放射性肺损伤相关的上调基因主要有CTHRC、EDN1、IGF1、RAD、Bcl-2、MDM2、XRCC5、ERCC5;下调基因主要有FGFR3、ERO1L、UNC5B、STK4、ATRX、TP53、NFKB、FAS。 4. 6周末A组与B组大鼠对比,差异表达基因中筛选出上调基因936个,下调基因752个。12周末处死的A组与B组大鼠对比,筛选出上调基因169个,下调基因183个。益气活血中药对放射性肺损伤相关基因CTHRC、FGFR3、EDN1、ERO1L具有一定的调控作用。 益气活血中药通过抑制TGF-β1、TNF-α、ET-1的表达,促进γ-IFN分泌,具有减轻早期放射性炎症反应和后期放射性肺纤维化的作用,对放射性肺损伤的防治具有较好作用。CTHRC1、FGFR3、EDN1、ERO1L等基因可能与放射性肺损伤的发生密切相关。益气活血中药可能通过调控放射性肺损伤相关基因CTHRC1、FGFR3、EDN1、ERO1L的表达,起到防治放射性肺损伤的作用。


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