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长角血蜱卵黄发生及其激素调控

杨小龙  
【摘要】:蜱类是专性吸血的外寄生动物,传播多种人、畜疾病且具极强的繁殖力,对人类健康和畜牧业造成极大危害。蜱类生殖生理学是国际上研究的热点领域,其中卵黄发生及其调控是该领域的核心内容。本研究以广泛分布于我国的长角血蜱Haemaphysalis longicornis Neumann为研究对象,运用组织培养、生物化学、分析化学、免疫细胞化学、酶联免疫分析、气相色谱/质谱和质量肽谱等现代生物学及其交叉学科的研究方法,在纯化出长角血蜱Vn基础上,对Vn与Vg的理化性质、蛋白序列分析、Vg合成组织与合成细胞定位、Vg合成分泌动态以及两类不同性质激素的作用进行了系统研究,对于深入阐明蜱类卵黄发生及其调控机理,揭示蜱类生殖生物学规律、适应对策和生理调节机制具有重要的科学意义。 长角血蜱Vn只有一种,是一种血糖脂复合蛋白,等电点为5.4,相对分子质量为370KD,由8个亚基组成,亚基相对分子质量分别为112KD、103KD、80KD、78KD、71KD、68KD、62KD和52KD。Vn亚基P1和P3的N-端序列测定表明,P1为N-端封闭,P3 N-端15个氨基酸顺序为YSVLPVYLPCFYEKC。本文首次将MALDI-TOF-MS技术应用于Vn蛋白序列的研究,获得8个Vn亚基的肽质量指纹图谱(PMF),将所得PMF数据在线进行比对,检索NCBI数据库。确定Vn各亚基为未被NCBI数据库所纪录的新蛋白。 应用GC/MS技术鉴定Vn糖分与脂类,结果表明,Vn的主要糖分为甘露糖和葡萄糖,另含微量的鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、山梨糖、N-乙酰葡糖胺和N-乙酰半乳糖胺;Vn脂类的主要脂肪酸成分为(Z)-13-十八碳烯酸和十八烷酸,另含少量14-甲基十五烷酸和8,11-十八碳二烯酸。 长角血蜱脂肪体由营养细胞构成,聚集细胞常伴随出现。在卵黄发生期,营养细胞含有大量与蛋白合成有关的细胞器。电泳结果显示,脂肪体蛋白具有多样性,成分复杂。饥饿期,脂肪体蛋白成分相对较少。吸血初期,蛋白成分有所增加,交配期无明显变化,饱血期蛋白成分增多。产卵初期,部分蛋白带消失。在雌蜱饱血后至产卵前阶段,脂肪体内蛋白成分最丰富。通过免疫印迹实验和免疫电镜观察,确证脂肪体是Vg的合成位点,中心区脂肪体与外周区脂肪体的营养细胞均合成Vg。 雌蜱吸血后血淋巴蛋白成分逐渐增加,饱血期蛋白成分最多,产卵初期有所减少。


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