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渤海鱼类寄生异尖属线虫的分子鉴定和群体遗传结构分析

史梅青  
【摘要】: 利用rDNA ITS区的PCR-RFLP(DNA扩增片段长度多态性)结合序列分析,首次对我国渤海6种鱼体内寄生的612条异尖属线虫幼虫进行分类鉴定。内切酶HinfⅠ的酶切电泳图包括两种酶切条带,分别对应于派氏异尖线虫(603条)和Abollo等(2003)所发现的重组基因型(9条)。选择3个派氏异尖线虫和全部的重组基因型样品进行ITS-1和ITS-2序列分析,结果表明酶切结果显示为派氏异尖线虫的样品与Genbank上已登录的派氏异尖线虫的ITS-1和ITS-2区的序列完全相同,再次证明其为派氏异尖线虫,而9条重组基因型在ITS-1区出现了2种序列,一种在280bp和296bp处各存在一个C/T双重叠峰(重组基因型Ⅰ,Rec1),该序列与Abollo等(2003)的结果相一致;另一种只在296bp处存在一个C/T双重叠峰(重组基因型Ⅱ,Rec2),该重组基因型为首次报道。两种重组基因型mtDNA SSU基因的序列分析显示Rec1的SSU序列与派氏异尖线虫的完全一致,而Rec2的SSU序列与派氏异尖线虫仅有1个碱基差异,推测本研究所发现的两种重组基因型有可能是派氏异尖线虫种内变异的结果。 首次采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)结合序列分析方法对我国渤海鱼类寄生派氏异尖线虫(603条线虫)mtDNA cox1和nad1基因的部分序列进行群体遗传结构研究,结果显示mtDNA cox1基因经DGGE产生了10种不同的带型,定义了10种单倍型(Haplotype1-10,Hap1-10),10种单倍型cox1基因序列之间存在10个多态性位点,nad1序列之间存在9个多态性位点,单倍型Hap3、Hap8和Hap10 nad1基因的序列完全一致。根据鱼类宿主划分派氏异尖线虫种群,分为6个种群,分别是鲐鱼种群(Pn),马鮫种群(Sc),鳙鱼种群(Ar),梅童棘头鱼种群(Co),吉氏黄鲫种群(Se)和鲬鱼种群(Pl)。分子方差分析(AMOVA)表明派氏异尖线虫种群内存在很高的遗传变异,占总变异的99.89%,种群间的遗传变异很小,仅占总变异的0.11%,说明渤海鱼类寄生派氏异尖线虫的遗传分化主要发生在种群内,种群间无明显分化。梅童棘头鱼种群与其余5个种群的遗传分化系数(Fst)在0.00836-0.04482之间,说明梅童棘头鱼种群与其余5个种群之间存在较弱的遗传分化;其余5个群体之间的Fst为负值,说明这5个种群无遗传分化。梅童棘头鱼种群和鳙鱼种群或马鮫种群之间遗传分化系数Fst值的P检验均出现显著差异(P0.05),说明梅童棘头鱼种群与鳙鱼种群或马鮫种群之间的分化程度相对于其他种群来说较高。10种单倍型的系统树显示出两个分支,但分支与宿主没有明显的相关性。渤海鱼类寄生派氏异尖线虫6个种群间的遗传分化很弱,说明派氏异尖线虫无宿主特异性。


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