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链霉菌182-2抗真菌活性物质的分离及抑菌特性的初步研究

卢赛飞  
【摘要】:链霉菌182-2代谢产生的抗真菌活性物质生物活性高,且性质稳定,其发酵液对烟草赤星、苹果斑点落叶和番茄早疫等链格孢属真菌有良好的抑制作用,具有开发为工业化产品的价值。本文主要以烟草赤星病菌为靶标,对该抗真菌活性物质进行了初步的分离纯化,并对初步纯化物的抑菌特性进行了研究。 (1)通过对发酵液进行预处理,除去了发酵液中的菌丝体、剩余培养基成分、一些高价离子和发酵过程中产生的其它代谢产物。 (2)采用活性炭吸附法,对预处理后的发酵液进行纯化脱色。结果表明活性物质的最佳吸附条件为:1.5mm柱状活性炭为最佳吸附活性炭;活性炭与发酵液的用量比为0.5g/mL;吸附温度28℃;摇床转速60r/min;吸附时间4h。活性物质的最佳洗脱条件为:50%丙酮为最佳洗脱剂;洗脱温度28℃;摇床转速60r/min:洗脱时间4h。发酵液经活性炭纯化脱色后,脱色率达77%,当其浓度为2000μg/mL时,抑菌圈直径为42mm。 (3)经活性炭纯化脱色后的粗提物采用大孔树脂柱层析法分离纯化。粗提物柱层析分离条件为:H103为吸附树脂;上样量为20 mL(2mg/mL);吸附流速为0.5mL/min;50%的丙酮为洗脱剂;洗脱流速为1mL/min。经大孔树脂吸附法纯化后,去掉了大部分的杂质,得到两个活性峰(峰Ⅰ和峰Ⅱ)。由此可见,该抗真菌活性物质至少含有两种有效组分。由于活性峰Ⅰ的抑菌效果较弱,且收集到的量较少,所以选择活性峰Ⅱ进行下步研究。 (4)以烟草赤星病菌为研究对象,对大孔树脂纯化后所收集的组分Ⅱ进行了抑菌特性测定。结果表明:离体条件下,当活性物质浓度为2000μg/mL时,对烟草赤星病菌有很强的抑菌作用,抑菌圈直径达58.0 mm;目测法测定抗生作用,表明其最小抑菌浓度(MIC)为80μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为160μg/mL;48 h时对菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高,抑菌中浓度(EC50)分别为31.9和42.2μg/mL;活性组分处理还可导致病菌菌丝和孢子萌发产生的芽管变形扭曲或产生大泡囊。


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