收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

飞蝗海藻糖酶基因的分子特性及功能研究

崔淼  
【摘要】:海藻糖是昆虫主要的血糖成分,对昆虫机体起供给能量的作用。海藻糖酶是特异性水解海藻糖的酶,而高等动物体内缺失这一代谢过程,因此,海藻糖酶被认为是设计安全高效杀虫剂的潜在靶标。本研究以重要农业害虫飞蝗为研究对象,探讨海藻糖酶基因的分子特性及功能,为飞蝗的有效治理提供一定的理论依据。主要研究内容如下:一、飞蝗海藻糖酶基因cDNA序列的获得及特征分析通过搜索飞蝗转录组,获得了3个海藻糖酶基因cDNA全长序列和1个海藻糖酶基因cDNA片段,进一步搜索飞蝗基因组获得其全长。Blast分析表明这4个海藻糖酶均含有海藻糖酶的两个功能保守区(PGGRFrEyYyWDtY和qWDyPNaWpP),以及一个甘氨酸富集区(GGGGEY)。TMHMM Server v.2.0分析发现一个基因具有跨膜结构域,将其命名为LmTreM,其余三个均为可溶性海藻糖酶,分别命名为LmTreSl、LmTreS2、LmTreS3。利用SignalP4.1 Server软件分析表明只有LmTreS3具有信号肽。二、飞蝗海藻糖酶基因在不同组织部位和发育时期的表达首先运用qPCR方法筛选得到EF-1α和β-actin为五龄飞蝗不同组织和发育时间的最适内参基因。进一步利用qPCR方法分析了海藻糖酶基因的mRNA表达,结果表明LmTreM在肌肉中特异性高表达,LmTreSl在马氏管和中后肠中表达较高,LmTreS2在体壁中表达最高,而LmTreS3在所有组织部位中相对均衡表达;之后分别选取表达最高的组织部位进行发育表达检测,发现LmTreM在五龄中期肌肉的表达量相对较高,LmTreS1在马氏管中随着发育天数增加表达量上升,在五龄中期的中后肠表达量较高,LmTreS2在体壁中随着发育时间增加表达量下降,LmTreS3在五龄飞蝗若虫发育过程中恒定表达。三、飞蝗海藻糖酶酶活测定利用己糖激酶法测定膜结合型和可溶性海藻糖酶的活性,取五龄飞蝗若虫每一天的肌肉组织进行LmTreM的活性测定,取五龄飞蝗若虫每一天的马氏管、中后肠测定可溶性海藻糖酶的活性。结果表明LmTreM在五龄第1天酶活性较高,后6天酶活性相对较低,可溶性海藻糖酶在马氏管中的活性随发育天数增加呈现逐渐升高的趋势,而在中后肠恒定表达。四、飞蝗海藻糖酶基因的功能研究为进一步研究海藻糖酶基因的功能及其对飞蝗生长发育的影响,我们采用了RNA干扰(RNAi)技术。分别注射LmTreM、LmTreS1、LmTreS2与LmTreS3的dsRNA至五龄第2天若虫,48 h后收集整虫样品提取RNA,利用qPCR技术检测4个海藻糖酶基因的沉默效率,结果表明各基因的表达均被有效沉默,且无交叉干扰现象。然而注射各基因的dsRNA后五龄若虫均可顺利蜕皮至成虫,表明海藻糖酶基因的沉默并不影响飞蝗蜕皮发育等生理功能。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 杜娟,林戈,卢光琇;人胚胎干细胞和分化细胞差别基因的筛选[J];遗传学报;2004年09期
2 邢少辰,林秀峰;分离基因的有效手段-mRNA差异显示技术[J];吉林农业科学;2004年02期
3 张冉;林浴霜;;不同品种鸡MSTN基因表达差异的研究[J];中国家禽;2012年06期
4 唐婷;柳峰松;任国栋;;谢氏宽漠王β-actin基因cDNA克隆、序列分析及表达量检测[J];昆虫学报;2008年11期
5 何蕾;薛仁宇;曹广力;胡小龙;贡成良;;基于RNA-Seq技术分析家蚕卵巢培养细胞(BmN)高表达基因[J];蚕业科学;2014年03期
6 杨红兰;张道远;刘燕;马瑞;张元明;;齿肋赤藓乙醛脱氢酶基因ALDH21的克隆与表达分析[J];基因组学与应用生物学;2010年01期
7 周鑫;柴保国;赵卫东;郑振宇;;小鼠早期胚胎发育过程中胚胎发育相关功能基因mRNA的表达[J];河南农业大学学报;2010年06期
8 王金玲;单雪松;杨雨江;王雪丽;;北京鸭/番鸭杂交体系肝脏组织基因表达差异的研究[J];家畜生态学报;2009年01期
9 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 张文俊;江华;赵耀忠;朱晓海;刘安堂;;皮肤恶性黑色素瘤与良性痣基因表达差异的研究[A];第四届华东六省一市整形外科学术会议暨2007年浙江省整形、美容学术会议论文汇编[C];2007年
2 杨劲松;郑新民;陈诗书;;诱导PTPα表达24小时NIH3T3细胞基因表达差异的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
3 孟金萍;刘云波;张以河;孙淑华;王艳蓉;吕凤柱;杨旭;;铅暴露U251细胞基因表达谱改变及基因通路分析[A];实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会论文汇编[C];2009年
4 刘丹慧;陈少松;罗崇林;肖雪媛;何大澄;;一个在肺癌中缺失的基因的筛选与初步研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
5 宾晓农;谭敏;吕嘉春;蒋义国;陈家堃;;基因芯片筛选BPDE转化16HBE相关基因的研究[A];第五届广东省环境诱变剂学会暨第三届广东省预防医学会卫生毒理专业委员会学术交流会论文集[C];2006年
6 霍晓芳;张俊武;;红系分化相关基因的鉴别与功能研究[A];中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会论文汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李倩;转Nramp1基因克隆牛的研制[D];西北农林科技大学;2015年
2 朱明库;番茄SlNAC4和SlDEAD31基因在果实成熟及非生物胁迫响应中的功能研究[D];重庆大学;2015年
3 陈鹏程;人类分子相互作用在线资源及多物种的基因集功能关联分析工具的建立[D];浙江大学;2015年
4 孙占斌;粉红螺旋聚孢霉67-1菌寄生相关基因的筛选与功能研究[D];中国农业科学院;2015年
5 韩洪强;控制茄子果型相关性状关键基因的克隆及功能研究[D];上海交通大学;2014年
6 王堃;牦牛基因组遗传变异图谱和高原适应的转录组研究[D];兰州大学;2015年
7 李鑫;小鼠腭裂相关基因的克隆、筛选及功能的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
8 孙各琴;幽门螺杆菌可塑区JHP947基因功能的初步研究[D];福建医科大学;2008年
9 周津;食管上皮癌变不同时期差异表达基因与基因表达概况的分析[D];中国协和医科大学;2000年
10 汪金荣;一个人类睾丸特异表达新基因-septin 12 transcript variant 2的克隆与功能初步研究[D];中南大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙姣姣;棉铃虫Serpin基因的克隆、表达及Feeding RNAi分析[D];河北大学;2015年
2 韩国英;棉铃虫和HaCHS和CDA基因的克隆、表达及Feeding RNAi分析[D];河北大学;2015年
3 汤常永;梨‘中矮1号’矮生基因的筛选及PcAHS克隆与表达分析[D];中国农业科学院;2015年
4 王庆峰;胶质类芽孢杆菌胞外多糖调节及相关基因的转录分析[D];中国农业科学院;2015年
5 崔淼;飞蝗海藻糖酶基因的分子特性及功能研究[D];山西大学;2014年
6 郝妍妍;玉米ZmSTKR基因的表达及其蛋白的磷酸化分析[D];华中农业大学;2015年
7 申艳;Let-7b通过其靶基因-TGFβR Ⅰ调控羊驼毛生长的研究[D];山西农业大学;2015年
8 贺望兴;灵芝全局性调控基因LaeA的克隆及其在灵芝酸生物合成过程中的差异表达[D];福建师范大学;2015年
9 唐奇;CRYAB基因在HCC中的表达、临床预后分析及抗凋亡功能研究[D];南京医科大学;2007年
10 杨波波;不同肿瘤基因表达分析中内参基因的选择和研究[D];西北大学;2014年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 吴一福;第四军医大学发现抑癌新基因[N];中国医药报;2008年
2 柯尊洪;基因技术在中药研究中的作用[N];中国中医药报;2002年
3 王兴 闫智勇 郝晓锋;借助基因技术发展现代中药[N];中国医药报;2003年
4 本报记者 吴红月;医院病理科借助基因检测延伸新服务[N];科技日报;2014年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978