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基于蛋白质内源荧光磷光的分子识别作用研究

卫艳丽  
【摘要】:荧光、磷光分析是发光分析的姊妹技术,因其简便、快速、高灵敏度和高选择性而引起了人们的广泛兴趣和关注。目前主要利用染料生色团在生物大分子上的键合作用引起光谱的改变而用于核酸、蛋白质等生物大分子的研究和测定。此外,研究表明,具有相反电荷的两种离子借静电引力、疏水作用力和电荷转移作用形成离子缔合物时,也能引起荧光、磷光的增强或减弱,并改变其光谱特征。这种方法已在痕量金属、非金属、有机物、环境分析和药物分析中得到越来越多的应用。 药物分析是分析化学的重要组成部分。在目前使用的化学药物中,大部分具有手性,其药理作用是通过与体内大分子之间严格的手性匹配与分子识别而实现的。随着手性药物重要性的不断增加,研究工作也日益深入,手性药物的分析研究也显得更加重要,急需开发一些新的分析技术和方法。迄今荧光、磷光法在手性药物分析中的应用研究甚少。我们的研究表明,对映体异构体分子能引起蛋白质荧光、磷光的对映选择性猝灭,据此可用于分子的手性识别中。这样,蛋白质对手性药物的研究和测定具有重要的应用前景,值得进一步加以研究。 本文分别以牛血清白蛋白和人血清白蛋白为例,研究了它们的荧光、磷光性质,考察了它们的光谱特征、适宜的分析条件和影响因素,建立和发展了测定它们的荧光、磷光分析法。 此外,本文还详细阐述了磷光分析法及其在科学研究中的应用,回顾了它的发展历程,介绍了理论基础、应用现状和新发展。 本文在国家自然科学基金(20275022)资助下,对以下内容进行了详细研究。 1.牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)荧光、室温磷光研究 提出了牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)的室温磷光法,蛋白质的磷光主要来自于包埋于其中的色氨酸残基,并对影响其室温磷光强度的的各种因素:如重原子浓度,酸度,除氧剂浓度等进行了详细研究,建立了测定痕量HSA和BSA的室温磷光法。该法是以KI为重原子微扰剂,在水溶液中用Na_2SO_3化学除氧后,以287nm为激发波长,BSA和HSA在443nm左右的磷光具有较好的重复性和稳定性。在此条件下它们


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