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利用DNA指纹图谱技术分析HFA仔猪肠道菌群结构

张宝让  
【摘要】:根据1995年国际“益生元之父”Dr.Glenn Gibson对益生元成分进行的定义,益生元(prebiotics)是指能通过选择性地刺激特定肠道菌的生长和活性而有益于宿主健康的非消化性食物成分,因此,科学地评估益生元产品的效果应以胃肠道微生物区系方面的信息为依据。本研究以人菌群相关(Human Flora-associated,HFA)仔猪粪便样品为研究对象,初步分析某益生元对HFA仔猪肠道菌群的影响。本论文主要包括以下两个方面: 1.对健康供体人肠道溶血菌的调查与分子鉴定 由于一些致病菌会产生毒素、内毒素或溶血素等物质破坏红细胞膜,由此而产生溶血现象,而幼小仔猪身体抵抗力较低,因此需要对给其接种的供体肠道菌群进行致病菌的检测。我们通过血平板分离培养,对17例无临床症状个体肠道内溶血菌的存在情况做了3周的动态调查,发现5例个体能检测到溶血菌,对分离到的溶血菌的16S rDNA进行ARDRA(Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis)酶切分型,将溶血菌分为两种类型,Ⅰ型16S rDNA全长测序后与蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus ATCC 10987)序列同源性达99%,Ⅱ型与埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli CFT073)的16S rDNA序列同源性达99%。最后利用ERIC-PCR指纹图谱技术对不同类型的溶血菌进行了菌株水平的鉴定。本研究表明在健康个体肠道内也有溶血菌的存在,且溶血菌的存在可能与机体的疲劳程度和饮食情况有关,所以应选择检测不到溶血菌的个体为供体,且供体在采样过程中应注意休息与饮食情况。 2.利用分子方法初步分析益生元成份对HFA仔猪肠道菌群的影响 对益生元的研究可分为两大类:体外研究(in vitro)和体内(in vivo)研究。体外研究方法即利用简单的批式培养或三阶段恒化器培养系统来研究细菌对各种低聚糖的发酵特性,大量研究结果表明,多种益生元成分可促使肠道双歧杆菌、乳杆菌数量增加,而使梭菌与拟杆菌的数量下降。益生元的体内研究则是给人体直接服用益生元并研究其肠道菌群的


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