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蜜环菌优化培养及生物活性的研究

周西贝  
【摘要】:蜜环菌(Armillaria mellea)是名贵药用植物天麻、猪苓生长过程中必不可少的共生菌,近些年来,其药用价值受到广泛关注,可镇静中枢、改善睡眠、增强免疫和调节神经,相关产品是治疗头痛、眩晕、神经衰弱等疾病的有效药物。因此快速培育高产优质的蜜环菌菌株对促进蜜环菌产业发展有重要作用。本研究旨在通过探索蜜环菌的最适培养条件和部分生物学特性,为实现蜜环菌快速培育做一些基础工作。 1.在含不同浓度松针浸提液的PDA培养基中,接入蜜环菌母种,25℃避光培养7天后,通过对比培养出的蜜环菌生物量,发现含松针浸提液30%的培养基对蜜环菌生长促进作用最强,比不含松针浸提液的对照培养基高出7倍,最适宜蜜环菌生长的是松针浸提液浓度为30%的培养基。2.将蜜环菌接种于松针培养基、马铃薯-胡萝卜培养基、牛肉膏培养基、木屑培养基、麦麸培养基、PDA培养基、胡萝卜培养基,25℃避光培养14d,发现蜜环菌在松针培养基上菌索萌发时间最短,生长速度最快,且菌索发达,菌体生物量最高。松针培养基是培养蜜环菌母种的适宜培养基。 3.通过对比4种生产种培养基中蜜环菌的生物量,筛选蜜环菌栽培种的培养基。发现以60%苹果枝、30%玉米芯、10%胡萝卜浇以营养液制作的生产种培养基蜜环菌的平均生物量为17.07g·mL-1,明显高于其他配方培养基,分别是1、2、3号培养基生物量的2.91、2.90、1.93倍,因此该配方比较适于培养蜜环菌栽培种培养。 4.在发酵培养基中添加不同量的胡萝卜、接种物、乙醇和豆油,通过对比培养出的蜜环菌生物量,发现添加5%胡萝卜时蜜环菌平均生物量增加64%;接种量大,蜜环菌生长和发酵好,4块接种量的生物量是1块的1.70倍;乙醇添加量为0.8%时能够促进显著蜜环菌生长;以豆油作为消泡剂,添加量在0.2%时效果最佳,蜜环菌生物量是未添加的1.73倍。 5.选5种农药,配制成含不同浓度药荆的培养基,接入蜜环菌,25℃培养避光培养14d后测量其菌落直径。发现随着百菌清、甲基托布津浓度的增加,蜜环菌菌落直径没有明显变化,而使用代森锰锌、腐霉利、多菌灵时,随着药剂浓度的增加,蜜环菌菌落直径逐渐减小。表明,百菌清、甲基托布津对蜜环菌的抑制作用不明显,蜜环菌对其敏感性差,而代森锰锌、腐霉利、多菌灵对蜜环菌的生长有明显的抑制作用,蜜环菌对其敏感。 6.选用70%乙醇、水和丙酮作为溶剂,分别对蜜环菌菌索进行有效成分提取,将提取出的3种液体和蜜环菌发酵液进行抑菌性实验,发现蜜环菌菌索的乙醇提取物对立枯丝核菌、灰葡萄孢菌、核桃炭疽病菌等3种真菌有一定抑菌效果,对菊池链格孢、青霉、黑曲霉、酿酒酵母等4种菌没有抑菌性;蜜环菌菌索的水提取物对立枯丝核菌也有一定抑菌效果,对其余6种供试菌没有抑菌性;蜜环菌菌索丙酮提取物和蜜环菌发酵液对7种供试菌都没有抑制性。而采用10%、20%、40%、80%、100%等5种浓度蜜环菌发酵液的培养基,对立枯丝核菌、灰葡萄孢菌、核桃炭疽病菌、菊池链格孢、青霉等5种供试菌的生长都有一定的促进作用,且随着发酵液浓度增大,促进作用增强。 7.选取黄瓜、西瓜和西红柿三种种子,用蜜环菌浸提液、蜜环菌发酵液和蒸馏水处理进行发芽试验,分析种子萌发率后发现,菌索提取液和蜜环菌发酵液对黄瓜种子、西瓜种子和西红柿种子的萌发率和发芽势均有显著抑制作用,且菌索浸提液对这三种种子的抑制作用更强。


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