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啤酒大麦外源Trx—S基因的基因枪转化及后代植株的遗传分析

李会勇  
【摘要】: 本实验以4个澳大利亚引进啤酒大麦品种(Stirling,Franklin,Gairdner,Harrington)为供试材料,研究了基因转化和植株再生过程中Cu~(2+)浓度对大麦组织培养的作用,不同受体材料、高渗处理对基因转化频率的影响;采用基因枪法对报告基因(Bar基因)和目的基因(TrxS基因)两个重组质粒进行了共转化,获得了再生植株,并对转化植株进行了检测和后代的遗传分析。结果表明:(1)5.0~10.0μMCu~(2+)可以显著地抑制胚芽鞘的生长,提高胚性愈伤组织的形成率,植株再生率;(2)以预培养15天的幼胚愈伤组织作为受体材料其转化频率明显高于当天剥取和预培养3~4天的幼胚;(3)在基因枪轰击前6小时和轰击后18小时,用0.5mol/l的甘露醇进行渗透处理,其转化频率会有明显的提高;(4)实验通过基因枪转化与再生培养,共获得了9株再生植株,PPT检测且均表现出抗性,半嵌套式PCR检测有7株含有TrxS基因;(5)通过半嵌套式PCR和PCR-Southern印迹杂交技术,对转基因后代植株进行遗传分析,发现T_1代转基因植株群体呈单基因显性遗传,分离比例接近3:1;T_2代转基因植株的不完全群体分离比例分别为1:1和8:1,这可能是由于T_1代就存在着嵌合体的缘故。


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