核桃体细胞胚胎发生影响因子的研究

【摘要】： 本试验以核桃子叶、胚及胚轴三种外植体为试材，研究了不同外源激素配比、不同培养条件下体细胞胚胎发生的影响因子，确定了适合三种外植体体细胞胚胎发生的最适培养基和培养条件。试验结果如下： 基本培养基的筛选结果表明，改良DKW培养基较MS、WPM培养基更符合核桃体细胞胚胎发生中所需的营养条件。以改良DKW培养基为基本培养基，对不同激素组合下不同发育时期外植体的体胚发生进行了探讨。试验结果表明，核桃子叶在授粉后第8-12周胚性愈伤组织发生率最高，可达58.89％，子叶在改良DKW+BA_(1.3mg／L)+KT_(2.2mg／L)+IBA_(0.02mg／L)的培养基上可产生胚性愈伤组织，继代于不含任何激素的改良DKW培养基上可诱导体胚发生；核桃胚在授粉后第6-8周胚性愈伤组织发生率最高，可达64.96％，在改良DKW+BA_(1.0mg／L)培养基上产生胚性愈伤组织，继代于同种培养基上则可诱导体胚发生；核桃胚轴在改良DKW+BA_(1.0mg／L)+2，4-D_(2.0mg／L)+KT_(1.0mg／L)的培养基上产生胚性愈伤组织，继代于不含任何激素的改良DKW培养基上可以诱导体胚发生。 试验对不同抗氧化剂、吸附剂和外植体预处理对防止外植体初植时期褐变的效果进行了研究。结果表明，初植外植体预处理效果最佳，其程序为：外植体灭菌前在2％Na_2S_2O_3溶液中浸泡20-30min，灭菌后浸入无菌的0.2％Na_2S_2O_3溶液中。 试验对继代周期、黑暗处理、琼脂凝固性、氮源和糖种类及浓度进行了试验，结果表明，改良DKW培养基中附加500mg／L的水解酪蛋白与250mg／L的L-谷氨酰胺，pH约为5.8，蔗糖浓度为4％，有利于核桃胚性愈伤组织的发生。30-35d后继代，但在转入诱导培养基前必须进行30-35d的暗处理，方可进行体胚发生和发育。