TGF-β1及其信号传导分子Smad2和Smad4在羊驼睾丸的表达与定位

【摘要】：雄性生殖机能及其调控机制的研究历来受到广泛关注,雄性生殖腺—睾丸雄性激素的分泌与精子的发生受到多种因素的调节,TGF-β1及其细胞内信号传导分子Smad2与Smad4蛋白参与睾丸发育及精子发生的调控。为了阐明TGF-β1在羊驼睾丸发育及精子发生中的作用及其作用的分子机制,本实验以12月龄和24月龄的羊驼睾丸为研究对象,采用Western Blotting技术,对TGF-β1,Smad2与Smad4在羊驼睾丸蛋白水平的表达进行研究;采用免疫组织化学SABC法对TGF-β1、Smad2与Smad4在羊驼睾丸的表达进行组织学定位。免疫组化的定量采用Mias-2000图象分析系统进行光密度(Opitical density,OD)的测定,实验结果用One-Way ANOVA单因子方差分析。 Westem blotting结果显示羊驼睾丸组织粗蛋白提取物中存在分子量约为25KD,与多克隆兔抗TGF-β1抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带;分子量约为52KD,与多克隆兔抗Smad2抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带;分子量约为62KD,与多克隆兔抗Smad4抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带;免疫组化结果显示TGF-β1及其细胞内信号传导分子Smad2与Smad4在12月龄和24月龄羊驼睾丸的间质细胞、支持细胞和各级生精细胞均有不同程度的表达。光密度测定结果显示:TGF-β1在12、24月龄羊驼睾丸间质细胞的光密度分别为0.7305±0.0115、0.5626±0.0122,在支持细胞分别为0.4207±0.0130、0.3257±0.0082,在精原细胞分别为0.4579±0.0092、0.3743±0.0158(P0.01),在管周肌样细胞分别为0.64554±0.0820、0.65694±0.0230(p0.05);Smad2在12、24月龄羊驼睾丸间质细胞的光密度分别为0.54460±01034、0.5712±0.0086(p0.05),在支持细胞为0.1741±0.0088、0.3794±0.01066,在精原细胞为0.30160±.01440、0.5604±0.0078(P0.01);Smad4在12、24月龄羊驼睾丸的间质细胞的光密度分别为0.7425±0.0113、0.6599±0.0107,在支持细胞为0.2552±0.0129、0.4699±0.0083,在精原细胞为0.4417±0.0138、0.5136±0.0089(p0.01),TGF-β1、Smad2与Smad4在同一年龄阶段的不同细胞的表达差异显著(p0.01,P0.05)。 结论:羊驼睾丸有TGF-β1及其细胞内信号传导分子Smad2与Smad4的表达;TGF-β1