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兽用疫苗中霉形体污染的PCR-ELISA检测技术的研究

贾丽艳  
【摘要】:霉形体是一种严重危害畜禽健康、生产率的病原微生物。它能污染细胞和疫苗等生物制品,严重影响着疫苗的预防疾病的效果,并潜在着传播霉形体病的危险,对畜禽业的发展可造成不可估量的经济损失。而要杜绝和防范霉形体的污染,检测技术显得尤为重要。 本试验是建立检测兽用疫苗中霉形体污染的PCR-ELISA方法,探索其最佳试验条件及优化组合,并与PCR检测法作对比,评价其应用价值。试验依据Genebank中登录的鸡源霉形体(鸡毒霉形体)和猪源霉形体(猪肺炎霉形体、猪滑液霉形体和絮状霉形体)的16s rRNA基因序列,运用DNASta(?)软件和Primer 5.0软件设计PCR特异性引物和探针,其中引物用地高辛标记,探针用生物素标记。然后以从培养的霉形体中所提取的DNA为模板,依据PCR-ELIsA技术原理设计试验,建立并优化PCR-ELIsA反应条件。最后用建立的PCR-ELIsA扩增体系和条件对从市场上随机购买的30批鸡新城疫Ⅰ系活疫苗样品、30批鸡新城疫La Sota系活疫苗样品和30批猪瘟活疫苗样品进行检测。检测结果表明:应用建立的PCR-ELIsA反应体系和条件可以从疫苗样品中检测到霉形体,检测率为35.6%,比PCR法的检测率高11.2%。该方法灵敏度高,特异性强,有望制备成试剂盒,在疫苗的霉形体污染检测中推广应用。


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