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鹿出血性肠炎疫苗研制及产气荚膜梭菌α毒素基因序列分析

郭宏伟  
【摘要】:本实验从山西绛县、阳泉、昔阳、灵石、太谷等地的共12 个鹿场采集病死鹿的肝、脾、肾、肠系膜淋巴结、病变小肠及其内容物或发病期间的血便,进行了病原菌的分离鉴定。从28 例鹿出血性肠炎病例中分离出22 株A 型产气荚膜杆菌,证明A 型产气荚膜梭菌是引起山西省鹿出血性肠炎的主要病原菌。从22 株分离菌中选取毒力最强的一株,定名为J5,进行最佳产毒条件的测定。结果显示:用肉肝胃酶消化汤,在35℃、7h 厌氧培养产毒效果最佳,其毒力可达100MLD/ml。在此最佳产毒条件下,进行培养,然后取培养液,用终浓度0.3%的甲醛进行灭活,5d 后在灭活检验合格的菌液中加入终浓度10%的氢氧化铝胶,2-8℃静置10d,弃总量1/2的上清液后摇匀,分装,无菌检验、安全检验、效力检验均合格。表明针对山西地方株的鹿出血性肠炎灭活单价苗研制成功。由于A型产气荚膜梭菌产生的主要毒力因子为α毒素,所以本试验进一步构建了α毒素基因的重组质粒,然后对α毒素基因进行克隆和核苷酸序列测定,经分析,结果与α毒素基因标准序列相一致,从而为进一步研制基因工程苗奠定了基础。


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