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蛋白酶抑制剂MG-132通过内质网应激调亡途径诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

白东  
【摘要】:第一部分探讨内质网应激指标在不同浓度的MG-132诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44损伤中的作用 目的:传代培养苏州大学人脑胶质瘤细胞株SHG-44,通过给予不同浓度的MG-132进行干预,观察内质网应激(ERS)指标在不同浓度药物处理后的变化情况。 方法:通过传代法培养人脑胶质瘤细胞。选取MG-132处理24小时,处理前(对照组)和不同浓度(5、10、15、50μmol/L)处理后的胶质瘤细胞,采用MTT比色法检测细胞活力;分别用RT-PCR和Western-bloting法检测内质网应激指标GRP78、Caspase-12的表达。结果:MTT比色法检测发现,MG-132处理24h后,5μmol/L的MG-132处理后SHG-44细胞活力明显下降43%(P0.05),可以达到最佳的抑制浓度。RT-PCR结果显示,经过MG-132处理24h后,SHG-44细胞内质网应激指标GRP78 mRNA表达在5、10、15、50μmol/L的MG-132处理后均有显著增加;Caspase-12 mRNA在经5μmol/L药物处理后表达显著增加,10、15μmol/L处理后较5μmol/L组表达增加不明显,50μmol/L处理后达高峰(P0.05)。Western-blot结果显示,ERS相关蛋白GRP78表达在经5μmol/L处理后显著增加,10、15μmol/L处理后较5μmol/L组表达增加不明显,50μmol/L处理后达高峰(P0.05)。 结论:在蛋白酶体抑制剂MG-132诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的过程中,ERS是发挥作用的主要通路之一 第二部分蛋白酶体抑制剂MG-132通过内质网应激凋亡途径JNK信号转导通路诱导SHG-44细胞凋亡的相关机制分析 目的:探讨内质网应激在MG-132诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44损伤中的表达情况;同时选择JNK信号转导通路作为研究对象,使用JNK信号通路的特异性抑制剂SP600125观察MG-132的作用变化,进一步分析MG-132在诱导人脑胶质瘤细胞凋亡中内质网应激的信号转导机制及作用。 方法:通过传代方法培养人脑胶质瘤细胞,用最佳抑制浓度的MG-132进行干预。实验分为5组:正常对照组、DTT组、MG-132组、SP600125组、MG-132+SP600125组。实验终止后,RT-PCR和Western-bloting方法检测内质网应激指标GRP78、JNK的表达。 结果:实验分组后,与对照组比较,给予MG-132作用24h后,细胞凋亡率显著增加(67.05±2.13% vs 6.05±3.42%, p0.05), GRP78 mRNA表达显著增加(p0.05);给予DTT后,凋亡率及GRP78 mRNA表达显著升高(P0.05),SP600125+MG-132较MG-132组显著减低,但不如单独SP600125组降低明显(p0.05)。Western-blot结果显示,与对照组比较,MG-132作用后可以引起ERS,MG-132作用24h后细胞内质网应激指标GRP78、JNK蛋白表达明显增加(p0.05), DTT组细胞GRP78、JNK蛋白表达明显增加(p0.05),SP600125+MG-132组GRP78、JNK表达有所减低,但不如单独给予SP600125组明显(p0.05)。 结论:1.蛋白酶体抑制剂MG-132可诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞凋亡; 2.在MG-132诱导胶质瘤细胞凋亡的过程中,ERS是发挥作用的主要通路之一; 3.JNK通路抑制剂SP600125可以部分阻断内质网应激,即JNK信号通路为MG-132发挥凋亡作用的途径之一。


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