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莱菔硫烷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

康小荣  
【摘要】:目的:探讨莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并进一步研究莱菔硫烷在保护内皮细胞损伤中的机制。方法:复苏由中国科学院上海细胞库提供的人脐静脉内皮细胞株,37℃、5%CO_2条件下培养细胞至80%以上融合度时,分组进行干预。实验分组:(1)空白对照组(对照组):细胞正常培养2.5小时;(2)过氧化氢组(H_2O_2组):分别给予100、200、400、600、800μM浓度培养细胞2小时,选择400μM为其最佳干预浓度(后续各组如未特殊注明,默认H_2O_2浓度为400μM);(3)莱菔硫烷+过氧化氢组(SFN+H_2O_2组):不同浓度SFN(2.5、5、10μM)预孵育30 min后,加入400μM的H_2O_2继续培养2h。收集干预后的各组细胞,用MTT法比较细胞活性,流式细胞技术测定细胞内ROS水平,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)测定细胞内转录因子核因子E2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)mRNA和血红素加氧酶-1(Heme oxygenase,HO-1)mRNA表达情况。结果:与对照组相比,H_2O_2组MTT法测定的细胞吸光光度值(A值)显著降低(P0.05),并浓度依赖性的使A值下降,SFN+H_2O_2组细胞吸光光度值高于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2组ROS水平高于对照组(P0.05),SFN+H_2O_2组ROS水平低于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平低于对照组(P0.05),SFN+H_2O_2组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平高于H_2O_2组(P0.05)。结论:莱菔硫烷对过氧化氢致HUVEC的氧化损伤有保护作用,其机制可能与莱菔硫烷在转录水平激活Nrf2/HO-1表达有关。


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