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肿瘤坏死因子-αmRNA及其受体Ⅱ在人精子表达的研究

田世河  
【摘要】: 目的 男性生殖系统内细胞因子及其对生殖功能的影响已引起广泛关注。细胞因子是一种免疫活性小分子多肽,是睾丸内各种不同细胞间繁杂的局部调节和信号传递的重要因素。在正常条件下,生殖系统内的免疫细胞、间质细胞、支持细胞及精原细胞分泌TNF-α等,参与调节生殖细胞的生长与分化,对生殖系统的神经内分泌、睾丸功能以及精子发生有重要的调节作用。但截至目前,TNF-α在单倍体生殖细胞的表达国内外文献报告甚少。为证实TNF-α在精子的合成及其对精子的直接作用,本题利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和序列测定技术从分子水平探讨TNF-α mRNA在生育正常者精子的表达情况和不育患者精子表达的变化。且证实肿瘤坏死因子受体(TNF-R_2)在人精子有表达,为TNF-α对精子的直接作用提供实验证据。 方法 取13例生育正常者与30例不育患者的精液WHO标准做常规指标检查,提取精子RNA,然后逆转录为cDNA,再经PCR扩增仪扩增,扩增产物通过2%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察、照相,在图像分析仪上与内参GAPDH相比得出相对值,数据行统计学处理。扩增产物测定其序列。用Western印迹法检测肿瘤坏死因子受体(TNF-R_2)在另外15例生育正常者精子的表达。 结果 正常生育者精子内TNF-α mRNA RT-PCR得到的肿瘤坏 顿卜学位i仑_之 丰 欠. 死1人】 (一l’NF一(‘)eDNA为6OZbp,内参oAPD毛1于广增z·、·二物片段为 23!bp门 /卜一台者精 TNF一u cDNA序列’J已J一民告的人其它组 织自J}IJ包内一fNI了- 。。l)从入l’l勺、} 。c0N,、的序列完全一致。正常生育者精J二 J乡JI匕化,I_为0.77士0.49。不育者精子「},TNF一u TNF- CDNA 的‘}凡士匀 {L{},汇为040士0.58, 沁j!浪态百分率及精子 不育者的精子密度、精子活动百分率、 ,一!,TNF一a,nRNA的表达均牙泛著低J’ 丁’l:育者的精子均仃肿瘤坏死囚J二受州 ﹃ *一洲硬‘常生一育苦。另外15{列门 N卜一l之:)l‘i勺廿 结沦人精J二;lJ’能会含成月几分泌细胞因子TNF一“,并以自分泌方 式调竹’}丫,J二的功能,某此可以分致不育的因索:!{一能干扰不一育症患 名米.,iJ汽‘f’NF一。.1‘}勺下丫zJ丈.卜i」11、」’‘;1起精液质量一l又.};午及不育,!七{JL制咬 怠义了自丫进声曰讲究训一实肿琉坏死囚f受体介人精子有表达, i气受体:,川走参’、J’TNF一(l了〔人精子的信号传递及对精子功能I’lfJ调 拧


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