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周围神经损伤后GDNF对脊髓前角运动神经元保护作用的实验研究

吴斗  
【摘要】: 周围神经损伤后疗效不佳是骨科尚未解决的难题之一,以往认为主要原因是神经吻合技术难度大、效应器官发生废用性萎缩等。近年来发现神经损伤后相应的脊髓神经元退变,严重时甚至死亡也是主要原因。神经元胞体结构是运动终板发挥作用和轴突再生的前提,一旦发生退变死亡便无再生能力,只有早期采取保护措施防止其退变死亡,才能为神经功能的恢复创造条件。但由于神经元远离损伤部位、没有有效治疗药物,而且存在血脑屏障阻碍常规给药,所以至今没有好的解决办法。 实验目的:对周围神经损伤后脊髓运动神经元死亡的可能机理——细胞凋亡进行研究,并观察其损伤的程度,探索通过逆行轴浆运输的方式给药,神经断端局部应用细胞因子GDNF(glial cell line-derived neurotrophic factor)对神经元施加保护作用,为临床提高神经损伤修复的疗效提供实验依据。 方法:成年SD大鼠共77只,雌雄不限,随机分为3组。正常组5只;手术+NS组和手术+GDNF组各36只。采用切断大鼠坐骨神经近端套接单盲管的实验模型。腹腔麻醉,取左股后正中切口,暴露坐骨神经切除股方肌下缘约1cm的一段神经,近端用6-0的无创线套接入硅胶管,其中填入 山西医科大学 硕士研究生毕业论文 少量明胶海棉,以微量加样器分别注入生理盐水或GDN[F 25川。神经套 入处及硅胶管远端以医用zT胶封固,缝合伤口,常规笼养。右侧为对照 侧。术后不同时间点分别取材,对以~6节段脊髓标本,冰冻切片,行HE 染色、TUNEL染色、电镜观察以及尼氏体染色、胆碱醋酶染色。图像分 析数据经SPSS软件处理,进行两组样本均数比较t检验。 结果:在周围神经损伤后NS组手术侧1正染色发现凋亡细胞,神经 元数量减少;n办正L染色阳性细胞1周时最多,3周时明显减少;电镜观 察术后3天时有凋亡早期表现,1周时有典型凋亡小体和不同阶段的凋亡 细胞同时存在。尼氏体染色发现神经损伤3天后出现脊髓前角运动神经元 存活率下降约14%,2周后为4仍么左右;胆碱醋酶阳性颗粒面积减少40% 左右,并且维持在这一水平。 GDNF组TUNEL染色标记的阳性细胞数量减少,电镜观察没有发现 典型凋亡细胞,而且神经元胞体形态基本正常;脊髓前角运动神经元的存 活率、胆碱醋酶阳性颗粒面积均明显提高,幅度在20%左右,均有显著性 差异。 结论:1,周围神经切断后可引起脊髓前角运动神经元发生细胞凋亡。 2,周围神经切断后脊髓前角运动神经元数量减少、胆碱醋酶功能减退。3, 神经断端局部应用外源性GD刊[F对脊髓运动神经元有保护作用。


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