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苦参碱对胆管癌细胞QBC939增殖的影响及其抗肿瘤机制探讨

张双卫  
【摘要】:目的:观察苦参碱对人胆管癌细胞QBC939体外增殖的影响,并进一步探讨其可能的作用机制。 方法:苦参碱和人胆管癌细胞QBC939共同孵育,用MTT法检测苦参碱对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的诱导和对细胞周期的影响;用光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化;用免疫组化的方法检测p27Kip1蛋白的表达情况。 结果:MTT法检测不同浓度苦参碱(0.25g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L)作用于细胞48小时后,实验组和对照组OD值比较 p0.01;细胞生长抑制率分别为21.23%、37.13%、57.32%、66.34%;苦参碱浓度和OD值呈直线负相关(r=-0.957)。1.0g/L苦参碱作用于细胞24小时~96小时后,不同时间段实验组和对照组OD值比较 p0.01;对照组中不同时间段之间OD值比较 p0.01,而实验组不同时间段OD值比较,24和48小时、48和72小时、72和96小时之间p0.05;细胞生长抑制率分别为37.21%、57.32%、67.45%、72.32%。流式细胞仪分析显示,不同浓度苦参碱作用于QBC939细胞48小时后 ,G0/G1 期细胞所占比例分别是56.15%、60.71%、64.07%、70.89%;而S期和G2/M期分别是29.70%、26.73%、25.35%、23.65%、21.39%和14.15%、12.56%、10.58%、8.73%、7.72%,但没有明显sub-G1凋亡峰。苦参碱浓度和G0/G1 期细胞数呈直线正相关(r=0.969),而S期和G2/M期呈直线负相关(r=-0.901和-0.922)。光学显微镜下随着药物浓度的增高,细胞肿胀明显,坏死碎片增多,细胞数目逐渐减少。透射电镜下观察,细胞浆内有大小不等的空泡,线粒体肿胀明显,没有凋亡的表现。免疫组化p27Kip1蛋白的表达随着苦参碱浓度的增加而增强,实验组和对照组灰度值比较p0.01,苦参碱浓度和p27Kip1蛋白灰度值呈直线负相关(r=-0.973)。 结论:苦参碱能够抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,在一定范围内呈现剂量-时间依赖性。其抗肿瘤的作用机制主要是通过细胞周期阻滞来实 WP=5 现的,而不是促进细胞凋亡。细胞周期阻滞于G0/G1 期,可能与上调p27Kip1蛋白的表达有关.。


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