苦参碱对胆管癌细胞QBC939增殖的影响及其抗肿瘤机制探讨

【摘要】：目的：观察苦参碱对人胆管癌细胞QBC939体外增殖的影响，并进一步探讨其可能的作用机制。 方法：苦参碱和人胆管癌细胞QBC939共同孵育，用MTT法检测苦参碱对细胞增殖的抑制作用；用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的诱导和对细胞周期的影响；用光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化；用免疫组化的方法检测p27Kip1蛋白的表达情况。 结果：MTT法检测不同浓度苦参碱（0.25g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L）作用于细胞48小时后，实验组和对照组OD值比较 p0.01；细胞生长抑制率分别为21.23％、37.13％、57.32％、66.34％；苦参碱浓度和OD值呈直线负相关（r＝－0.957）。1.0g/L苦参碱作用于细胞24小时～96小时后，不同时间段实验组和对照组OD值比较 p0.01；对照组中不同时间段之间OD值比较 p0.01，而实验组不同时间段OD值比较，24和48小时、48和72小时、72和96小时之间p0.05；细胞生长抑制率分别为37.21％、57.32％、67.45％、72.32％。流式细胞仪分析显示，不同浓度苦参碱作用于QBC939细胞48小时后 ,G0/G1 期细胞所占比例分别是56.15％、60.71％、64.07％、70.89％；而S期和G2/M期分别是29.70％、26.73％、25.35％、23.65％、21.39％和14.15％、12.56％、10.58％、8.73％、7.72％，但没有明显sub-G1凋亡峰。苦参碱浓度和G0/G1 期细胞数呈直线正相关（r＝0.969），而S期和G2/M期呈直线负相关（r＝－0.901和－0.922）。光学显微镜下随着药物浓度的增高，细胞肿胀明显，坏死碎片增多，细胞数目逐渐减少。透射电镜下观察，细胞浆内有大小不等的空泡，线粒体肿胀明显，没有凋亡的表现。免疫组化p27Kip1蛋白的表达随着苦参碱浓度的增加而增强，实验组和对照组灰度值比较p0.01，苦参碱浓度和p27Kip1蛋白灰度值呈直线负相关（r＝－0.973）。 结论：苦参碱能够抑制胆管癌细胞QBC939的增殖，在一定范围内呈现剂量－时间依赖性。其抗肿瘤的作用机制主要是通过细胞周期阻滞来实 WP=5 现的，而不是促进细胞凋亡。细胞周期阻滞于G0/G1 期，可能与上调p27Kip1蛋白的表达有关.。