TNF-α联合PGE_2和氧化苦参碱对成纤维细胞信号物质的影响

【摘要】：目的:研究肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)联合前列腺素E_2(PGE_2)和氧化苦参碱对肺成纤维细胞信号物质的影响,从细胞信号转导的角度探讨尘肺发病机制,为寻找治疗尘肺的分子靶点提供依据。方法:对SD大乳鼠肺成纤维细胞原代培养,传至4-5代后,用不同浓度的TNF-α、不同浓度的PGE_2联合TNF-α、不同浓度氧化苦参碱联合TNF-α刺激成纤维细胞后,检测如下指标:1.放射免疫技术测定细胞内1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的含量。2.流氏细胞技术测定细胞内钙离子(Ca~(2+))的浓度。3.免疫细胞化学技术测定细胞膜TNF-α受体的表达。结果:1.TNF-α作用成纤维细胞时,随着TNF-α剂量的增加,TNF-α受体表达阳性率、IP_3 cpm值和Ca~(2+)浓度均呈上升趋势,对照组与其它三个剂量组比较,有明显差异(P0.05),Ca~(2+)流氏图显示,10μg/L组(蓝图)Ca~(2+)浓度流氏图的高峰较其它三个组明显右移;10μg/L TNF-α组cAMP、cAMP/cGMP值在4h明显高于其它组(P0.05);在24h较其它组低。2.TNF-α与PGE_2联合作用时,TNF-α受体表达阳性率、30s和60s的IP3cpm值、Ca~(2+)浓度在各个联合作用组较TNF-α单独作用时要低,Ca~(2+)浓度流氏图显示,当PGE_2浓度为2.0μg /L时(黄图),Ca~(2+)荧光峰左移明显;随着PGE_2剂量的增加,cAMP表现为先升高后降低;10μg/L TNF-α组cAMP值较其它组低,其差异有显著性(P0.05);4h时,10μg/L TNF-α+0.5μg/L PGE_2组的cAMP/cGMP比值较10μg/L TNF-α组明显升高;4h各个组cAMP/cGMP比值均比24h高。3.TNF-α与苦参碱联合作用时, TNF-α受体表达阳性率、Ca~(2+)浓度在各个联合作用组较TNF-α单独作用时低,Ca~(2+)流氏图显示,当苦参碱浓度为800mg/L(蓝图)时,流氏图高峰明显左移;随苦参碱浓度的升高,cAMP值 和cAMP/ cGMP比值逐渐升高,当苦参碱浓度为800mg/L时,cAMP值和cAMP/ cGMP比值达到最高。结论:1.TNF-α与细胞膜上的相应受体结合后,可能通过改变GPCR介导的信号通路上第二信使物质,从而对肺成纤维细胞发挥作用。2.外源性PGE_2可能是治