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固相萃取-光化学荧光-高效液相色谱法测定血浆中叶酸含量

陈璇  
【摘要】:叶酸(folic acid)系由2-氨基-4-羟基-6-甲基蝶呤、对氨基苯甲酸及谷氨酸组成的水溶性B 族维生素,在人体内转化成四氢叶酸,参与氨基酸及核酸的合成。由于人体代谢过程极为复杂,叶酸生物样品的分析测定尤为困难,普通的测定方法难以对其进行检测。本文采用固相萃取法对叶酸血浆样品进行前处理,首次应用大孔吸附树脂作为萃取固定相,同时,还研究了叶酸的光化学行为,发现叶酸本身有弱荧光,在一定的反应介质中,经光化学诱导,可产生较强的荧光产物,从而明显改善检测灵敏度。同时,结合高效液相色谱技术,可进一步提高分析方法的灵敏度和选择性。 目的建立一种灵敏度高、选择性好的测定叶酸血浆样品的分析方法。 方法用LD605 大孔吸附树脂处理叶酸血浆样品后,将其置于磷酸盐缓冲液(0.05 mol·L~(-1),pH 5.4)中,经紫外灯照射50 分钟,高效液相色谱分析:以C18柱作为固定相,甲醇-磷酸盐缓冲液(0.05 mol·L~(-1),pH 5.4)为流动相(V/V27.5:72.5),流速:0.8 ml·min~(-1),柱温:25℃,在λ激发=280 nm 和λ发射=443 nm 处进行荧光检测。 结果叶酸血浆样品的浓度在0.100~100.0μg·ml~(-1)范围内与色谱峰面积呈良好线性关系(r=0.9988),萃取回收率在80.2%以上,方法回收率不低于79.4%,日内日间精密度(n=5)均小于7.8%,检测限为10 ng·ml~(-1)。 结论本法具有准确、灵敏、选择性好、回收率高等特点,能满足叶酸生物样品的测定。


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