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小檗碱对人大网膜前脂肪细胞增殖与分化的影响

阴津华  
【摘要】:目的: 1、原代培养人大网膜前脂肪细胞并进行鉴定。 2、观察离体状态下人大网膜前脂肪细胞增殖和分化的过程。 3、研究小檗碱对人大网膜前脂肪细胞增殖与分化的影响。 方法: 1、原代分离培养人大网膜前脂肪细胞: 选择择期开腹手术病人,无全身代谢及内分泌疾病,无服用干预糖及脂肪代谢的药物史。年龄小于50 岁,体重指数小于25。 取无菌条件下新鲜切除的人大网膜脂肪组织,剔除肉眼可见的结缔组织与血管,充分剪碎的脂肪组织用I 型胶原酶消化。消化后的絮状液筛网过滤,滤液离心后弃上清,加入基础培养基制成细胞悬液,细胞计数接种。 2、原代培养的人前脂肪细胞增殖过程的观察: 10~4/cm~2接种原代人前脂肪细胞。DMEM-F12 培养液+10%小牛血清+10 万IU/ml 青链霉素溶液配制人前脂肪细胞基础培养液。用MTT 法观察其生长状况和增殖过程,绘制出生长曲线。 3、原代培养的人前脂肪细胞分化过程的观察: 10~4/cm~2接种原代人前脂肪细胞。DMEM-F12 +5%小牛血清+10 万IU/ml青链霉素溶液+胰岛素0.5μM~+地塞米松0.2μM+ IBMX0.5mM + 甲状腺素0.2nM 配制人前脂肪细胞分化培养液。观察前脂肪细胞分化过程中的形态学改变,并用油红O 染色抽提法测定细胞内脂肪含量,绘制油红O 的时间-OD值曲线,并对未分化的细胞和被油红O 染成红色的细胞照相。 4、小檗碱对人前脂肪细胞增殖和分化的影响: 小檗碱分别加入基础和分化培养基配制成0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol/l 三个不同浓度的干预液。分别在其增殖与分化的两个阶段,观察不同时间段小檗碱对细胞增殖分化的影响。以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测人前脂肪细胞增殖的变化,以油红O 染色检测人前脂肪细胞分化的变化。


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