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内皮素-1在门脉高压血管病变发病中的作用机制研究

王斗  
【摘要】: 【目的】了解内皮素(ET-1)在门脉高压大鼠模型中对转移生长因子(TGF-β)、核转录因子kappa-B(NF-κB)蛋白的表达及分布,ET-1对血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达及分布的影响,阐明ET-1在门脉高压血管病变发病中的作用机制。 【方法】制备门静脉部分结扎门脉高压大鼠模型,应用ET-1受体拮抗剂Bosentan,采用放射免疫法测定循环血液中ET-1浓度;对组织标本进行HE染色,观察病理变化:应用免疫组织化学法检测内脏血管组织中TGF-β、NF-κB蛋白表达及分布情况:采用原位杂交技术检测内脏血管组织中VEGFmRNA表达及分布情况:并对上述结果进行图像分析。 【结果】一.血清ET浓度的检测结果:正常对照组(SO组)ET-1浓度为:142.39±5.02pg/ml,门脉高压组(PH组)ET-1浓度(211.56±5.98 pg/ml)明显高于SO组,与SO组相比有显著性差异(p<0.05)。Bosentan组为:216.20±4.48 pg/ml,与PH组相比差异无显著性(p>0.05)。说明药物Bosentan不会影响血清ET-1浓度。二.光镜观察结果:PH手术组:门静脉内膜增厚,内含增生的胶原纤维和大量方向不一的平滑肌,中膜层显著增厚,肌纤维增粗,致密,外膜层有炎细胞浸润。应用ET-1受体拮抗剂Bosentan后,血管病变程度减轻。三.免疫组化检测结果:(一)TGF-β蛋白表达:SO组仅有少量TGF-β蛋白的表达,PH组TGF-β蛋白的表达量明显增高,图像分析结果显示:PH组的积分光密度(1718.5±27.93)及阳性反应细胞数(6.61±0.15)均明显高于SO组(积分光密度765.12±15.61,阳性反应细胞数1.22±0.05),差异有显著性(p<0.05)。Bosentan降低了TGF-β蛋白的表达,Bosentan组的积分光密度(1416.6±21.68)及阳性反应细胞数(5.22±0.25)与PH组相比差异均有显著性(p<0.05)。(二)NF-kB蛋白表达:图像分析结果显示,PH组的积分光密度(1836.40±33.11)及阳性反应细胞数(9.29±0.36)明显高于SO组的积分光密度(599.60±18.99)及阳性反应细胞数(1.01±0.05),差异有显著性(p<0.05)。Bosentan组的积分光密度(960.73±21.61)及阳性反应细胞数(6.49±0.21)均明显低于PH组,差异有显著性(p<0.05)。四.原位杂交检测结果:VEGFmRNA阳性信号为棕黄色颗粒,定位于细胞浆。SO组仅有少量VEGFmRNA的表达,PH组VEGFmRNA的表达量明显增高,图像分析结果显示:PH组的积分光密度(1706.20±34.23)及阳性反应细胞数(8.71±0.58)均明显高于SO组(积分光密度为771.22±19.84,阳性反应细胞数为1.52±0.14),差异有显著性(p<0.05)。Bosentan组VEGFmRNA的表达量明显下降,积分光密度为1070.39±15.28、阳性反应细胞数为5.02±0.27,与PH组相比差异有显著性(p<0.05)。 【结论】在门脉高压大鼠动物模型中,ET-1浓度升高,通过影响TGF-β、NF-κB、VEGF的表达及转录,促进了门脉高压血管病变的发生:应用ET-1受体拮抗剂Bosentan可降低TGF-β、NF—κB、VEGF的表达及转录,从而部分抑制门脉高压血管病变的发生。


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