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过敏性休克小鼠体内NO含量、NOS的活性与Eotaxin的表达及其法医学意义

赵杰  
【摘要】: 目的:观察组胺和一氧化氮(nitric oxide,NO)在过敏性休克小鼠肺组织中随时间变化的规律,探讨NO及嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)在过敏性休克中的作用,试图为过敏性猝死的法医学鉴定提供可靠的形态学依据。 方法: (1)将小鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用卵蛋白致敏小鼠,建立过敏性休克模型。分别于休克不同时间段(休克前、休克后0.5h、休克后12h、休克后24h、休克后48h)提取小鼠肺组织;(2)采用Shore等荧光测定法并加以改良测定肺组织中的组胺含量随休克时间的变化;(3)采用硝酸盐还原法检测肺组织中NO含量随休克时间变化;(4)通过血管通透性测定实验,证实NO与血管的通透性升高有直接的关系;(5)应用酶组织化学技术对一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)染色;(6)应用免疫组化SABC法对Eotaxin进行染色,并用BI-2000计算机图像分析系统进行图像分析,计算阳性积分光密度值(IOD)。 结果: (1)致敏组动物在致敏原激发前肺组织中组胺含量明显高于正常对照组(P0.01)。致敏原激发时即刻迅速下降,低于正常对照组,仅为激发前的40%,差异非常显著。以后呈逐渐回升趋势,12h以后即高于正常对照组,48h后回升为激发前的95%,基本接近于激发前水平。而正常对照组动物组织中组胺含量则始终无明显变化。(2)致敏组动物在致敏原激发前肺组织中NO含量明显高于正常对照组(P0.01)。致敏原激发时即刻迅速下降,低于正常对照组,仅为激发前的49%,差异非常显著。以后呈逐渐回升趋势,12h以后即高于正常对照组,48h后回升为激发前的96%,基本接近于激发前水平。而正常对照组动物组织中NO含量则始终无明显变化。(3)NOS酶组织化学染色显示:实验组为阳性染色,表明当过敏性休克发生时,NOS的活性大大增强。(4)IHC结果显示:与对照组相比,实验组Eotaxin表达明显增加。 结论:过敏性休克时,小鼠肺组织内组胺和NO的含量在过敏性休克发病过程有着动态的变化,经统计学分析,过敏性休克小鼠肺组织中组胺含量与NO含量呈正相关,且相关性非常显著,而且通过血管通透性实验也证实NO与血管通透性升高有直接的关系,为进一步应用酶组织化学对NOS染色来诊断过敏性休克的发生提供了实验上的支持。并且发现随着过敏性休克发生,小鼠肺组织中的Eotaxin表达明显增加,与对照组相比有显著的统计学差异。因此,应用酶组织化学技术对NOS染色和免疫组化技术对Eotaxin进行染色,可以为法医学过敏性休克急死提供客观的辅助诊断依据。


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