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尖孢镰刀菌高产纤维素酶菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

王玮  
【摘要】:本文对实验室保藏的121株尖孢镰刀菌(形态学鉴定)进行了产纤维素酶的研究,通过初筛复筛得到了了5株纤维素酶的高产菌株。对所得菌株进行了[TS序列鉴定和粗酶液酶学性质分析,并进行了发酵产酶条件的优化。 通过刚果红染色观察水解圈的方法从121株尖孢镰刀菌(形态学鉴定)中初步筛选出20株酶活较高的菌株。从初筛得到的20株菌种通过粗酶液酶活测定和酶活力计算,筛选出纤维素酶活力最高的5株菌,其中H57-1酶活力达到16.41U/ml。 对筛选出的5株菌进行ITSrDNA序列测定。测序结果利用www.NCBI. nlm. (?)ih. gov中BALST软件,与Genbank数据库进行序列比对分析,结果显示5株菌均与尖孢镰刀菌(Fusarium Oxysporum Schlech)亲缘关系最近,相似性达99%。 对菌株H57-1的粗酶液酶学性质进行了分析。以CMC-Na为底物,其最适反应条件为PH=5.3,62℃。该酶具有良好的pH稳定性和温度稳定性,尤其作为真菌对强碱环境的耐受能力,一定程度上能弥补真菌纤维素酶耐碱性差和细菌纤准素酶酶活低的不足。 对菌株57-1最适产酶发酵条件进行了优化。以麸皮48.0g/L、蛋白胨14.0g/L磷酸二氢钠2.0g/L、氯化铵3.9g/L、氯化钠2.0g/L、pH7.0配制发酵培养基,取3mL种龄48h的种子液接种发酵培养基,温度28℃、摇床转速150r/min振荡培养85h,最终酶活力达到23.19U/ml,比初始酶活力提高了41.3%。


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