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花粉管通道法转化甜瓜品种河套蜜瓜方法的比较研究

苏日娜  
【摘要】: 本研究以甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L. cv Hetao)为实验材料,比较研究了花粉管通道法导入的线状和环状表达载体,以及携带和不携带核基质附着区序列的表达载体对花粉管通道法转化效率的影响;摸索花粉管通道法转化河套蜜瓜的最佳导入时间、最佳导入浓度及适宜的柱头切割方法。对转基因后代进行检测时,先应用叶片涂抹法初步筛选抗生素抗性植株,再对抗性植株进行PCR检测。结果表明:线状和环状表达载体都能成功转化得到阳性植株,转化率没有明显差异;目的基因表达盒两侧携带核基质附着区序列,对花粉管通道法转化河套蜜瓜没有促进作用。摸索最佳导入时间的实验结果显示,在自花授粉后1-11h之内导入外源DNA都能成功转化得到阳性植株,授粉后5h导入外源DNA转化率最高,授粉24h以后导入均没有检测到阳性植株;摸索最佳导入浓度的实验结果表明,四种浓度导入的转化率没有显著差异;探索适宜的柱头切割方法的实验结果显示,切除全部柱头导入的转化率最高。 通过本研究,初步明确了载体的线状和环状形式、载体是否携带核基质附着区序列对转化效率没有显著影响。同时,明确了最适导入时间为授粉后5h。本研究结果为花粉管通道法转基因技术在甜瓜上的应用提供了参考依据。


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