收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

沙棘木蠹蛾白僵菌高毒菌株筛选和几丁质酶基因克隆及其微胶囊制剂的研究

杨帆  
【摘要】:沙棘(Hippophae rhamnoides L. subsp. sinensis Rousi)是我国黄土丘陵区生态建设、经济树种之一,在内蒙古、辽宁等地分布面积广。沙棘木蠹蛾(Holcocerus hippophaecolus Hua, Chou, Fang et Chen)钻蛀危害沙棘干和根部,造成沙棘大面积死亡。球孢白僵菌(Beauveria. bassiana)侵染沙棘木蠹蛾幼虫和蛹,导致其死亡。为更好利用白僵菌防治沙棘木蠹蛾,本文从菌株筛选、酶活性、几丁质酶基因克隆、分生孢子萌发促进剂、微胶囊研制及其生物测定等方面对寄生于沙棘木蠹蛾的球孢白僵菌进行了比较系统的研究,主要内容包括: 1.白僵菌菌株筛选:从病死沙棘木蠹蛾幼虫和蛹中分离纯化得到5株球孢白僵菌菌株。室内通过比较生长速度、产孢量、萌发速度、不同温、湿度下的分生孢子萌发率、对高温的耐性、抗紫外线照射等方面筛选优良菌株。结果表明,SJ-05菌株的各项生长指标较优秀。SJ-05在76%的湿度下萌发率为60%,是SJ-03的2.5倍。50℃高温胁迫18 min,SJ-05的萌发率为48.77%,是SJ-03的2.5倍。紫外线持续照射8 h,SJ-05萌发率最高为33.92%是SJ-02的2.0倍。表明SJ-05菌株抗低湿能力、耐热性和抗紫外照射能力强,为优良菌株。 2.白僵菌菌株酶活性及几丁质酶基因克隆:采用平板测定法和Lowry及DNS测定法对白僵菌菌株胞外蛋白酶和几丁质酶活性进行测定。优良菌株SJ-05胞外蛋白酶产量为55.3 U/mL,几丁质酶产量为137.9 U/mL,分别是菌株SJ-01的3.5倍和4.3倍。克隆得到球孢白僵菌几丁质酶基因,其核苷酸序列阅读框架全长1 047 bp,编码348个氨基酸。推测其分子量为36.9 KDa,等电点为5.94,可能是从球孢白僵菌中克隆的一新几丁质酶基因。 3.营养液、酸碱度、继代培养及促进剂对SJ-05孢子萌发的影响:1%蛋白胨、1%蔗糖和1%蚕蛹表皮3种营养液都可促进孢子萌发。孢子萌发最适pH值为6.0~7.0。培养第5代后,SJ-05分生孢子的萌发率、萌发速度均明显下降,培养16h时,第3代的萌发率为97%,第4代的萌发率为87%,第5代的萌发率仅为40%。AA、BB两种促进剂对白僵菌分生孢子的萌发有明显促进作用,并随浓度的增大对孢子萌发的促进作用均有不同程度的增强,培养14 h和18 h时,1.5 ppm AA、BB两种促进剂中孢子萌发率高,分别为46%和96%,分别是对照组的2.6倍和2.5倍。促进剂CC对分生孢子萌发率的促进作用不明显,高浓度时有一定抑制作用。 4.微胶囊的研制与性能测定:用界面聚合法对SJ-05分生孢子制备微胶囊,通过4因素4水平正交试验,C含量100%、E含量0.5%、F浓度0.5 M、转速500 r/min是制备微胶囊的最优组合。在61%湿度下,SJ-05微胶囊孢子萌发率为33.85%,分生孢子菌悬液不萌发。微胶囊与分生孢子悬液经30W、40cm处紫外线照射后的孢子萌发率均下降,但是微胶囊有一定的抗紫外能力。紫外照射10 h,微胶囊孢子萌发率26.91%,分生孢子悬液孢子萌发率仅3.92%。 5.生物测定:室内模拟野外条件,SJ-05分生孢子及微胶囊对沙棘木蠹蛾幼虫的的致死率分别为45.54%和84.54%,说明SJ-05微胶囊对沙棘木蠹蛾幼虫的侵染明显高于其分生孢子。同时,室内测定SJ-05对枸杞负泥虫幼虫、落叶松毛虫幼虫及沙棘木蠹蛾幼虫的侵染,SJ-05分生孢子对三种害虫幼虫的LC_(50)分别为3.45×10~7个孢子/mL、2.92×10~7个孢子/mL和9.79×10~6个孢子/mL,SJ-05微胶囊对落叶松毛虫幼虫和沙棘木蠹蛾幼虫的LC50分别为1.03×10~7个孢子/mL和2.95×10~6个孢子/mL。分离自感病沙棘木蠹蛾幼虫的菌株对沙棘木蠹蛾幼虫的致死中浓度低,侵染率强。比较相同浓度分生孢子及微胶囊对同种昆虫的侵染率,微胶囊的更强。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宗世祥,骆有庆,许志春,温俊宝,贾峰勇;沙棘木蠹蛾卵和幼虫空间分布的地统计学分析[J];生态学报;2005年04期
2 杨奋勇;许胜利;王瑛凯;苏梅;刘秀峰;靳嵘;;狗獾控制沙棘木蠹蛾的初步调查[J];中国森林病虫;2007年01期
3 宗世祥,贾峰勇,许志春,骆有庆,张连生,梁树军;沙棘木蠹蛾的幼虫空间分布与抽样技术[J];昆虫知识;2004年06期
4 路常宽,宗世祥,骆有庆,许志春,赵怀玉;沙棘木蠹蛾成虫行为学特征及性诱效果研究[J];北京林业大学学报;2004年02期
5 宗世祥,贾峰勇,骆有庆,许志春,张连生,梁树军;沙棘木蠹蛾危害特性与种群数量的时空动态研究[J];北京林业大学学报;2005年01期
6 魏运亨;;沙棘木蠹蛾发生形势严峻[J];农药市场信息;2005年15期
7 骆有庆,路常宽,许志春;暴发性新害虫沙棘木蠹蛾的控制技术[J];国际沙棘研究与开发;2003年01期
8 李红梅;;沙棘木蠹蛾防治措施评价[J];中国林业;2008年06期
9 路常宽,盛茂领,骆有庆;毛缺沟姬蜂形态特征及生物学初步研究[J];中国生物防治;2005年02期
10 宗世祥,王涛,骆有庆,路常宽,陈亮;沙棘木蠹蛾蛹的发育起点温度和有效积温研究[J];国际沙棘研究与开发;2004年02期
11 贾峰勇,许志春,宗世祥,骆有庆,张连生,梁树军;沙棘木蠹蛾幼虫化学防治的研究[J];中国森林病虫;2004年06期
12 王萍;席忠诚;;沙棘木蠹蛾的综合防治[J];中国林业;2009年08期
13 方宇凌,孙江华,赵成华,孙永平,郑红旗,张钟宁;沙棘木蠹蛾(鳞翅目:木蠹蛾科)性信息素组分鉴定及其生物活性[J];昆虫学报;2003年05期
14 宝山;曹川健;李德家;温俊宝;;宁夏沙棘木蠹蛾危害风险分析[J];宁夏农林科技;2008年05期
15 路常宽,许志春,贾峰勇,骆有庆;小卷蛾斯氏线虫对沙棘木蠹蛾幼虫的室内侵染能力[J];中国生物防治;2004年04期
16 周章义;梁华军;尹伟伦;张庆;;控制沙棘木蠹蛾灾害的有效方法—挖根灭虫[J];中国森林病虫;2008年03期
17 姜宗辉,梁树军;沙棘木蠹蛾综合防治与生态管理措施[J];水土保持科技情报;2004年04期
18 路常宽;王晓勤;冯长红;骆有庆;李成;;沙棘木蠹蛾在全球的分布区预测(简报)[J];河北科技师范学院学报;2007年02期
19 彭其民,夏志立;沙棘木蠹蛾幼虫空间分布型及抽样技术[J];辽宁林业科技;2004年02期
20 路常宽;骆有庆;李镇宇;荆玉栋;马超德;徐双民;;沙棘木蠹蛾潜在分布区预测与分析[J];北京林业大学学报;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡巍;黄秀梨;;白僵菌属分类学研究的历史回顾[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
2 李增智;;白僵菌的分类和鉴定[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
3 徐庆丰;;我国研究和利用白僵菌防治农林害虫及有关问题的探讨[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
4 石美宁;朱方容;;广西森林防虫白僵菌农药对家蚕致病性的试验[A];全国家蚕病害控制技术与安全养蚕模式学术研讨会论文集[C];2010年
5 王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
6 王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
8 戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
9 方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
10 朱炎平;邱君志;关雄;;粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)几丁质酶基因克隆的研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨帆;沙棘木蠹蛾白僵菌高毒菌株筛选和几丁质酶基因克隆及其微胶囊制剂的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
2 陶静;沙棘木蠹蛾种群遗传结构与灾害发生机制的分子生态学研究[D];北京林业大学;2012年
3 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
4 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
5 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
6 魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
7 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
8 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
9 王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
10 李伟;圆锥小麦地方品种遗传多样性研究[D];四川农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李华祥;高产孢白僵菌的发酵与茶叶病害虫防治[D];江南大学;2012年
2 王志政;不同树种(品种)对沙棘木蠹蛾的抗性研究[D];北京林业大学;2010年
3 黄桐毅;沙棘木蠹蛾干扰下建平县沙棘人工林的景观格局动态研究[D];北京林业大学;2011年
4 魏灵燕;不同白僵菌菌株的生物学特性比较及HFW-05菌株田间种群动态[D];河北农业大学;2012年
5 骆海玉;生物农药白僵菌对家蚕的致病性研究[D];广西师范大学;2012年
6 李冬琳;白僵菌的形态与分子鉴定及对东亚飞蝗的致病作用[D];河南科技大学;2012年
7 张艳梅;油松毛虫受白僵菌感染的组织病理学及菌制剂的研究[D];山西大学;2011年
8 甄伟;白僵菌对小菜蛾、棉铃虫的毒力比较及侵染机制差异性研究[D];河北大学;2011年
9 鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
10 刘占通;猪α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒活性研究[D];河南农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 武炳明;防治沙棘木蠹蛾急需特效药[N];农民日报;2004年
2 记者 武炳明;急需:治沙棘木蠹蛾特效药[N];农资导报;2004年
3 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
4 刘越西 徐仁元 记者 金姝;世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛在吉大农学部培育成功[N];吉林日报;2011年
5 黄勇娣;世界首例转基因克隆兔在沪诞生[N];解放日报;2007年
6 曹斌;血癌新病毒基因克隆成功[N];团结报;2000年
7 许沈华;什么是基因克隆[N];家庭医生报;2007年
8 王婷婷;我国完成世界首例转基因克隆兔实验[N];科技日报;2007年
9 王有佳;全球首例转基因克隆兔在沪诞生[N];人民日报;2007年
10 李建平;首例荧光转基因克隆猪所产猪崽再次被确认具有荧光特征[N];大众科技报;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978