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传染性喉气管炎病毒内蒙98a株TK基因的克隆、序列分析及核酸探针的研究

田双喜  
【摘要】: 本研究采用鸡胚绒毛尿囊膜接种培养的方法,对ILTV-NM98a株和ILTV-王岗株进行增殖。根据已发表的ILTV TK基因的核苷酸序列设计一对PCR引物,以增殖的两株ILTV的DNA为模板,分别对它们的TK基因进行PCR扩增。将回收的PCR产物连接到适当的质粒载体上,转化感受态大肠杆菌,通过筛选对ILTV TK基因的阳性克隆进行扩增培养。利用适当的限制性内切酶回收TK基因片段,并用地高辛进行标记,制备成核酸探针。 本研究中首次对ILTV-NM98a株的TK基因进行了克隆和序列分析,结果表明:ILTV-NM98a株TK基因的核苷酸序列与已发表的ILTV TK基因的核苷酸序列具有高度的同源性,两者之间仅相差4个核苷酸,同源性高达99.7%,从而证实了ILTV TK基因是高度保守的,为ILTV TK基因核酸探针的制备提供了有力的依据。 采用斑点杂交的方法,对ILTV TK基因核酸探针进行特异性和敏感性检测。结果表明:该种核酸探针具有高度的特异性,它仅与ILTV的DNA呈现阳性反应,而与新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒的核酸等均呈阴性反应。该种探针具有高度的敏感性,能够检测到20pg的ILTV的DNA。


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