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骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的克隆及序列分析

唐博  
【摘要】:抗菌肽是生物天然免疫系统中的重要组成部分,具有杀灭病菌、保护机体的作用。防御素是其中一大家族,广泛分布于动物、植物体内,具有高效、广谱抗微生物活性。防御素具有不同于抗生素的独特的抗菌机制,这种抗菌机制不会使病菌变异。据分子结构特征和来源不同,防御素又分为α-防御素、β-防御素、θ-防御素、昆虫防御素和植物防御素。我们利用其他反刍动物(牛和羊)cDNA的保守序列设计引物,从骆驼舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出caBD-1(camelβ-defensin-1)的cDNA,并重组到pBlueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的caBD-1的cDNA为β-防御素。因为该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素特征性结构即六个保守的半胱氨酸残基。cDNA末端快速扩增 (Rapid Amplification of cDNA Ends)技术简称RACE技术。我们采用锚式PCR RACE技术和反向嵌套 PCR RACE技术分别扩增出caBD-1的3ˊ末端和5ˊ末端,经克隆和测序得到caBD-1的cDNA全长序列。


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