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牛磺鹅去氧胆酸对小鼠免疫功能的调节作用及其机理研究

石有斐  
【摘要】: 牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic Acid,TCDCA)是动物胆汁的主要有效成分之一,其化学名称为3α,7α-二羟基-5β-24-胆烷酰-N-牛磺酸,是由牛磺酸(Taurine,Tau)和鹅去氧胆酸(Chenodeoxycholic acid,CDCA)相结合而成的酸性化合物。本课题系统的开展了TCDCA的免疫调节作用研究工作,旨在探讨TCDCA对正常和免疫功能低下小鼠机体的免疫调节作用及其机理。其主要内容包括: (1)采用鸡红细胞半体内法、ELISA方法和实时荧光定量PCR技术分别检测了TCDCA对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能、外周血中IL-1β和IgG含量、脾脏IL-2基因的表达的影响。实验结果显示:TCDCA按0.1g/kg·b·w口服给药,能够极显著提高小鼠腹腔巨噬吞噬功能,且达到最大作用强度;能够显著提高外周血中IL-1β和IgG含量;能够提高脾脏IL-2的表达量;而TCDCA分别按0.153g/kg·b·w和0.189g/kg·b·w给药,则均能显著抑制小鼠腹腔巨噬吞噬功能;降低脾脏IL-2的表达量;当TCDCA剂量达0.189g/kg·b·w时,还能显著抑制外周血中IgG含量。因而表明,TCDCA的正常机体的免疫调节作用与其剂量有密切关系,即剂量在0.043~0.1g/kg·b·w范围内,对机体特异性和非特异性免疫功能呈增强作用,剂量为0.1g/kg·b·w的作用最强,当剂量大于0.1g/kg·b·w时,免疫作用开始减弱,甚至产生抑制作用。 (2)采用MTT法、吞噬中性红法、ELISA方法分别检测了TCDCA及其代谢产物CDCA和Tau对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的增殖反应、细胞因子分泌等免疫功能的影响。实验结果显示: ①终浓度为0.1、1和10μg/ml的TCDCA对正常腹腔巨噬细胞增殖反应具有显著的增强作用;终浓度为0.01、1和10μg/ml的TCDCA对LPS诱导增殖反应有显著的协同作用。终浓度为0.01、0.05、1μg/ml的TCDCA对腹腔巨噬细胞分泌IL-1β具有显著的增强作用;终浓度为0.01μg/ml的TCDCA对LPS诱导的腹腔巨噬细胞分泌IL-1β有显著的协同作用;终浓度为1μg/ml的TCDCA对LPS刺激的腹腔巨噬细胞分泌IL-1β具有显著的抑制作用。TCDCA对正常腹腔巨噬细胞吞噬功能无显著作用。 ②终浓度为0.1和1μg/ml的TCDCA对脾淋巴细胞增殖反应具有显著的增强作用;终浓度为0.1μg/ml的TCDCA对ConA刺激的增殖反应有显著的拮抗作用;TCDCA对LPS和CsA刺激的脾淋巴细胞增殖反应均无显著作用。终浓度为0.01μg/ml的TCDCA对脾淋巴细胞分泌IL-2具有显著的增强作用;TCDCA对ConA刺激的脾淋巴细胞分泌IL-2则无显著作用;终浓度为0.01μg/ml的TCDCA对LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IL-2有显著的协同作用;终浓度为0.05μg/ml的TCDCA对LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IL-2具有显著的拮抗作用;终浓度为0.01μg/ml的TCDCA对CsA抑制的脾淋巴细胞分泌IL-2的协同抑制作用达显著水平。终浓度为0.01和0.05μg/ml的TCDCA对脾淋巴细胞分泌IgG具有显著的增强作用;终浓度为0.05和0.1μg/ml的TCDCA对LPS诱导的脾淋巴细胞分泌IgG有显著的协同作用。 ③终浓度为0.5和5μg/ml的CDCA和Tau对正常和亚适量LPS刺激的腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞的增殖反应及脾淋巴细胞分泌IgG均无显著作用。终浓度为0.5和5μg/ml的CDCA和Tau对正常腹腔巨噬细胞分泌IL-1β均有显著的增强作用。终浓度为5μg/ml的CDCA对腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有显著的增强作用;终浓度为5μg/ml的Tau对腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有显著的抑制作用。终浓度为0.5μg/ml的CDCA对正常脾淋巴细胞分泌IL-2具有显著的增强作用;终浓度为0.5和5μg/ml的Tau无论是对正常还是ConA、LPS刺激的脾淋巴细胞分泌IL-2具有显著的或者极显著的增强作用;终浓度为0.5μg/ml的Tau对CsA抑制的IL-2分泌具有显著的恢复作用。 (3)评价了TCDCA分别对CTX和CsA制备了非特异性和特异性免疫功能低下小鼠模型的作用。结果显示:TCDCA按0.1g/kg·b·w口服给药,对非特异性免疫功能低下小鼠模型腹腔巨噬细胞的吞噬功能和特异性免疫低下小鼠模型外周血中的IgG均具有显著的增强或恢复作用。 (4)分析了TCDCA的体内代谢调控网络,预测该药对神经-内分泌-免疫调节系统的影响,并采用放射免疫方法检测了给药后小鼠血清中皮质醇的含量。结果显示:TCDCA按0.1g/kg·b·w口服给药,对小鼠神经-体液-免疫调节系统中皮质醇的含量具有极显著的增强作用。 本试验研究的主要结论如下: (1)TCDCA增强小鼠免疫功能的最适给药剂量为0.1g/kg。 (2)TCDCA无论对小鼠机体非特异性免疫功能还是特异性细胞免疫、体液免疫功能均呈现出显著的剂量依赖性的双向免疫调节作用。 (3)TCDCA无论是对正常小鼠机体或者免疫功能低下小鼠均有明显的免疫调节作用。 (4)TCDCA对小鼠机体免疫功能的调节作用是TCDCA及其代谢产物CDCA和Tau共同直接作用于免疫细胞以及对机体神经-体液-免疫调节系统产生影响的结果。


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