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羊胃肠线虫对常用驱虫药抗药性的初步研究

蔡葵蒸  
【摘要】: 小反刍家畜(绵羊和山羊)消化道线虫对驱虫药的抗药性已成为全世界面临的严重问题。我国在该方面的研究相对滞后,鉴于目前养羊生产中存在的问题和寄生虫病防制的需要,本课题从以下几个方面开展了初步研究,结果如下: (1)用粪便虫卵减少试验(FECRT)对我国北方宁夏地区的18个羊场(绵羊羊场12个,山羊羊场6个)进行了抗药性流行病学调查,发现有25%的羊场(4/16)对丙硫苯咪唑(albendazole)有抗药性,在1个山羊羊场和5个绵羊羊场中查出有2个羊场对阿维菌素(avermectin)存在可疑抗药性。 (2)通过体外虫卵孵化试验(EHA),对宁夏、内蒙古地区23个羊场中25份田间样品用丙硫苯咪唑和噻苯咪唑(thiabendazole)做了对比性检测,结果表明两者对所有样品中受检虫卵的半数致死量(LD50)无显著差异,将LD50值与减卵试验进行比较分析,两者的吻合率为75%以上,具有较好的一致性。 (3)以人工选择的抗苯并咪唑虫株和敏感株作对照,用幼虫发育试验(LDA)检测了4家羊场的田间样品,建立了幼虫发育试验检测苯并咪唑、左旋咪唑、阿维菌素抗药性的方法。 (4)从田间分离出一株抗药性捻转血矛线虫(Haemonchus contortus),经幼虫发育试验鉴定其对伊维菌素和左旋咪唑敏感,经虫卵孵化试验鉴定对苯并咪唑有抗药性,抗药性指数(RF)为10。该虫株人工接种后22~72d内,虫卵对苯并咪唑LD50呈动态变化,LD50值在接种后50d左右达到高峰。 (5)对来自田间的181份捻转血矛线虫雄虫样品,用PCR-SSCP分析β-微管蛋白部分基因片段,结果表明药物处理后的样品中,突变基因型占20%(3/15)、杂合基因型占60%(9/15)、正常型占20%(3/15),其余自然感染群体样品则分别为3.6%(6/166)、7.8%(13/166)和88.6%(147/166)。 (6)对来自田间的64份捻转血矛线虫雄虫样品,其中10份为药物处理后样品,用PCR-RFLP分析了它们的β-微管蛋白同种型I基因200位密码子核苷酸的多态性,证明在我国苯并咪唑抗药性线虫中,存在该位点的突变。结果分析显示药物处理组抗药性等位基因频率为45%,其余三组自然感染群体样品中抗药性等位基因的频率平均为9.3%。 (7)初步测定了来源4个不同地区的捻转血矛线虫β-微管蛋白同种型I基因370bp片段DNA的序列,经与公认的苯并咪唑抗药性捻转血矛线虫β-微管蛋白基因的相应序列对比分析表明,在此片段上存在着12处多态性位点,证明该线虫存在遗传和抗药性等位基因的多样性。 (8)调查了目前我国三种不同养羊模式的6个羊场90份粪便样品,结果表明全舍饲养殖后胃肠线虫感染明显减少,这与放牧情况下的感染状况正好相反,而半舍饲状况介于两者之间;在同一饲养条件下,山羊比绵羊感染率和感染强度都高。最后,作者提出了与抗药性相关的寄生虫病综合防制策略。


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