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内蒙古地区牛传染性鼻气管炎病毒的分离与鉴定

张鹏飞  
【摘要】: 本试验从内蒙古自治区6个地区的奶牛场和奶牛养殖户采集了429份牛血清,并对这些血清利用酶联免疫吸附试验试剂盒进行牛传染性鼻气管炎(IBR)检测。结果显示,在所调查地区的奶牛群中存在着不同程度的牛传染性鼻气管炎病毒感染(IBRV),最高感染率达92.00%,最低的仅为2.78%,平均感染率为46.62%。 从呼和浩特地区采集了14份疑似IBR的病料,将这些病料利用PCR法进行IBRV检测,有4份病料扩增出了IBRV的特异性片段(339bp)。将4份病料处理后接种犊牛睾丸细胞传代培养,分离病毒,在盲传到第7代时,接种采自疑似IBR流产胎牛实质脏器病料的细胞出现圆缩、聚集成葡萄样群落、在单层细胞上形成空洞、有时会发现有数个细胞核的巨大细胞、在48~72h即完全出现病变并脱落等病变,且随着传代次数的增加,CPE更加规律。而其余三份病料接种细胞后均未分离到病毒。将病毒一直传代到第11代,然后对所分离病毒进行TCID50测定、理化特性鉴定、血清中和试验以及PCR鉴定。结果为:分离株病毒在接种量为100μl/孔时,测定的TCID50值为10-6.75/100μl,而在接种量为20μl/孔时,测定的TCID50值为10-3.375/20μl;分离病毒对乙醚、氯仿和胰蛋白酶敏感,不耐酸碱;所分离病毒可被IBRV阳性血清中和,中和抗体滴度为2-8.1;分离株用IBRV特异性引物经PCR扩增出了其gB基因的高保守区(339bp)。以上试验证实本试验所分离到的病毒IBRV。


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